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Medios y reactivos

40 productos

Insulin, Human recombinant, Solution (5 mg/ml)

Volume: 5 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered Insulin Human Recombinant Solution is a chemically defined supplement commonly used for the cultivation of mammalian cell lines, including Chinese Hamster Ovary (CHO) cells. This cell culture–grade solution contains recombinant human insulin expressed in Saccharomyces cerevisiae, ensuring high purity and consistent performance in research applications. Application and Benefits Insulin is routinely added to serum-free and chemically defined media to promote cell growth and productivity. As a key regulatory hormone, insulin supports cellular uptake, utilization, and storage of glucose, amino acids, and fatty acids. It also inhibits the breakdown of glycogen, proteins, and lipids, thereby contributing to improved cell viability and metabolic stability in culture systems. The chemically defined formulation supports reproducibility and minimizes variability in sensitive cell culture workflows. Biological Properties and Usage Insulin is a two-chain polypeptide hormone naturally produced by the β-cells of the pancreatic islets. It has a molecular weight of approximately 5,800 Da. The α- and β-chains are linked by two interchain disulfide bonds, and the α-chain contains one intrachain disulfide bond. For cell culture applications, the solution should be handled under aseptic conditions and stored at +2°C to +8°C to maintain stability and performance. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€109.00

sin impuestos ni gastos de envío

Insulin-Transferrin-Selenium (ITS), Solution 100x

Volume: 10 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) Solution (100x) is a chemically defined supplement designed for a wide range of cell culture applications. It is most commonly used as an additive to basal cell culture media to support cell growth under reduced-serum or serum-free conditions. Application and Benefits Our ITS supplement provides essential components required for the optimal performance of serum-free media. By supplementing conventional nutrient media with ITS, the fetal bovine serum (FBS) requirement for the routine maintenance of many cell lines can be significantly reduced. This helps minimize variability associated with serum use while maintaining consistent cell growth and viability. Insulin supports cellular uptake and metabolism of key nutrients, transferrin facilitates iron transport, and selenium contributes to antioxidant defense and enzymatic activity. Together, these components promote balanced cell metabolism and improved reproducibility in defined culture systems. Formulation and Usage Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) is supplied as a 100x concentrated solution in Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) without phenol red. For standard applications, dilute 1:100 into the appropriate basal medium to achieve the recommended working concentration. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to maintain product stability and sterility. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€59.00

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McCoys 5A medio (modificado), p/v: 3,0 g/L de glucosa, p/v: glutamina estable, p/v: 2,0 mM de piruvato de sodio, p/v: 2,2 g/L de NaHCO₃

El medio 5A de McCoy es un medio especializado y muy recomendado, diseñado para facilitar el crecimiento y la replicación de virus en cultivos de células primarias. Ha obtenido un gran reconocimiento por su excepcional rendimiento en diversas aplicaciones de investigación biológica. Una aplicación destacada del medio McCoy's 5A es su uso en el cultivo de líneas celulares de carcinoma de colon humano. Concretamente, se ha empleado en el estudio del receptor acoplado a proteína G que contiene repeticiones ricas en leucina (LGR5) y su papel en la metástasis del cáncer de colon. Este medio se ha empleado con eficacia en el cultivo de varias líneas celulares de carcinoma de colon, entre ellas HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b y TENN, lo que ha permitido a los investigadores profundizar en los mecanismos subyacentes a la metástasis del cáncer de colon. Además de su aplicación en la investigación del cáncer, el medio McCoy’s 5A ha demostrado ser indispensable en el estudio de los osteoblastos. Los investigadores que estudian la reactividad iónica de la hidroxiapatita deficiente en calcio en medios de cultivo celular estándar han utilizado este medio para cultivar osteoblastos. Esta aplicación ha facilitado una mejor comprensión de las interacciones entre los osteoblastos y la hidroxiapatita deficiente en calcio, lo que ha contribuido a los avances en el campo de la investigación ósea. El medio McCoy’s 5A se formuló meticulosamente modificando los aminoácidos presentes en el medio basal Eagle para proporcionar un soporte óptimo a las células tumorales hepáticas. Esta formulación enriquecida lo hace adecuado para una amplia gama de líneas celulares establecidas, así como para células primarias, lo que mejora aún más su versatilidad y aplicabilidad en diversos entornos de investigación. El medio McCoy's 5A amplía sus efectos bioquímicos y fisiológicos más allá de las células tumorales hepáticas. Se ha empleado con éxito para favorecer el crecimiento en cultivos primarios de médula ósea, piel, encía, riñón, epiplón, glándula suprarrenal, pulmón, bazo, embriones de rata y otros tipos de células. Esta amplia gama de aplicaciones demuestra la gran utilidad del medio 5A de McCoy para favorecer el crecimiento y el mantenimiento de diversos tipos de células con vistas a una investigación biológica exhaustiva. Formulación Este medio McCoy's 5A (modificado) contiene 3,0 g/L de glucosa, glutamina estable, 2,0 mM de piruvato de sodio y 2,2 g/L de NaHCO₃. Control de calidad • pH = 7,2 ± 0,02 a 20-25 °C. • Se ha comprobado la esterilidad de cada lote, así como la ausencia de micoplasmas y bacterias. Conservación • Conservar refrigerado a una temperatura comprendida entre +2 °C y +8 °C, al abrigo de la luz. La congelación y el calentamiento hasta +37 °C reducen la calidad del producto. • No caliente el medio a más de 37 °C ni utilice fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, microondas). • Si solo se va a utilizar una parte del medio, extraiga dicha cantidad del frasco y caliéntela a temperatura ambiente. • El plazo de conservación de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 6 a 8 semanas a partir de la fecha de apertura. Composición Componentes mg/L Sales inorgánicasCloruro de calcio x 2H₂O132,00 Sulfato de magnesio97,67 Cloruro de potasio400,00 Cloruro de sodio6.460,00 Hidrogenofosfato disódico (anhidro)504,00 Otros componentesD(+)-glucosa (anhidra)3.000,00 Glutatión (reducido)0,50 Peptona de carne600,00 Sal sódica de rojo fenol11,00 AminoácidosL-alanina13,36 L-arginina x HCl42,14 L-asparagina x H₂O45,03 Ácido L-aspártico19,97 L-cisteína x HCl x H₂O31,75 L-glutamina (estable)219,15 Ácido L-glutámico22,07 Glicina7,51 L-histidina x HCl x H₂O20,96 L-hidroxiprolina19,67 L-isoleucina39,36 L-leucina39,36 L-lisina x HCl36,54 L-metionina14,92 L-fenilalanina16,52 L-prolina17,27 L-serina26,28 L-treonina17,87 L-triptófano3,06 Sal disódica de L-tirosina26,10 L-valina17,57 VitaminasÁcido p-aminobenzoico1,00 Ácido ascórbico0,56 D(+)-biotina0,20 Pantotenato de calcio D0,20 Cloruro de colina5,00 Ácido fólico10,00 mio-inositol36,00 Nicotinamida0,50 Ácido nicotínico0,50 Clorhidrato de piridoxal0,50 Clorhidrato de piridoxina0,50 Riboflavina0,20 Clorhidrato de tiamina0,20 Vitamina B122,00

€30.00

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Medio 199, p/v: 2,7 mM de glutamina estable, p/v: 2,2 g/L de NaHCO₃, p/v: EBSS

El medio 199 es un medio de cultivo celular versátil y ampliamente utilizado, formulado especialmente para el cultivo de explantes primarios. Este medio completo combina vitaminas esenciales, aminoácidos y otros factores para proporcionar una fuente de nutrientes totalmente definida para una gran variedad de tipos celulares. Es especialmente adecuado para células no transformadas, lo que lo convierte en una herramienta inestimable para la investigación biológica. El Medio 199 ofrece una amplia gama de aplicaciones en este campo. Es capaz de mantener eficazmente el complejo cumulo-ovocitario (COC) y favorecer la maduración in vitro de los ovocitos. Además, se emplea en el lavado de los tubos de aspiración durante la recogida de óvulos de vacas de la raza Holstein alemana. Por otra parte, el Medio 199 constituye un excelente medio para el cultivo de células endoteliales cardíacas derivadas de ratas. Estas aplicaciones demuestran la versatilidad y adaptabilidad del Medio 199 a diversas necesidades experimentales. Historia El desarrollo del Medio 199 en la década de 1950 supuso un avance significativo en los medios de cultivo tisular. Antes de su introducción, muchos medios de cultivo se basaban en productos de origen animal y extractos de tejidos. Sin embargo, Morgan y sus colegas revolucionaron el campo al formular una fuente nutricional completamente definida para los cultivos celulares. A través de sus experimentos, en los que utilizaron diferentes combinaciones de vitaminas, aminoácidos y otros factores, descubrieron las excepcionales propiedades del Medio 199 para promover el crecimiento. Control de calidad • pH = 7,2 ± 0,02 a 20-25 °C. • Se ha comprobado la esterilidad de cada lote, así como la ausencia de micoplasmas y bacterias. Conservación • Conservar refrigerado a una temperatura de +2 °C a +8 °C, protegido de la luz. La congelación y el calentamiento hasta +37 °C reducen la calidad del producto. • No caliente el medio a más de 37 °C ni utilice fuentes de calor incontrolables (por ejemplo, microondas). • Si solo se va a utilizar una parte del medio, extraiga dicha cantidad del frasco y caliéntela a temperatura ambiente. • El plazo de conservación de cualquier medio, excepto el medio básico, es de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación. Composición Componentes mg/L Sales inorgánicas Cloruro de calcio x 2H₂O 264,92 Nitrato de hierro (III) x 9H₂O 0,72 Sulfato de magnesio 97,67 Cloruro de potasio 400,00 Acetato de sodio x 3H₂O 82,95 Cloruro de sodio 6.800,00 Dihidrogenofosfato de sodio x H₂O 140,00 Otros componentes Sulfato de adenina 10,00 AMP 0,20 ATP 1,00 Colesterol 0,20 2'-Desoxirribosa 0,50 D(+)-Glucosa anhidra 1,000.00 Glutatión (red.) 0,05 Guanina x HCl 0,30 Hipoxantina 0,30 Rojo de fenol 10,00 D-ribosa 0,50 Timina 0,30 Tween 80 4,90 Uracilo 0,30 Xantina 0,30 NaHCO₃ 2 200,00 Aminoácidos L-alanina 25,00 L-arginina x HCl 70,00 Ácido L-aspártico 30,00 L-cisteína x HCl x H₂O 0,10 L-cistina 20,00 L-glutamina estable 149,00 Ácido L-glutámico 67,00 Glicina 50,00 L-histidina x HCl x H₂O 21,88 L-hidroxiprolina 10,00 L-isoleucina 20,00 L-leucina 60,00 L-lisina x HCl 70,00 L-metionina 15,00 L-fenilalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-serina 25,00 L-treonina 30,00 L-triptófano 10,00 L-tirosina 40,00 L-valina 25,00 Vitaminas Ácido 4-aminobenzoico 0,05 Ácido ascórbico 0,05 D(+)-biotina 0,01 Calciferol 0,10 Pantotenato de calcio D 0,01 Cloruro de colina 0,50 Ácido fólico 0,01 mio-inositol 0,05 Menadiona 0,01 Ácido nicotínico 0,025 Nicotinamida 0,025 Piridoxal x HCl 0,025 Piridoxol x HCl 0,025 Riboflavina 0,01 Sal disódica del fosfato de DL-α-tocoferol 0,01 Tiamina x HCl 0,01 Acetato de vitamina A 0,14

€40.00

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Medio de cultivo celular NCI-H295R

Descubre el avanzado medio de cultivo celular NCI-H295R, una solución nutritiva elaborada por expertos y diseñada específicamente para favorecer el crecimiento y el mantenimiento de líneas celulares de mamíferos, incluidas las células especializadas NCI-H295R. Este medio destaca por su mezcla única de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) y F-12 de Ham (mezcla de nutrientes F-12) en una proporción precisa de 1:1, enriquecida con suplementos esenciales para satisfacer las complejas necesidades del cultivo celular. Fórmula mejorada para un rendimiento superior en el cultivo celular • Base suplementada: El medio básico ya es muy rico, ya que combina las altas concentraciones de aminoácidos y vitaminas del DMEM con los diversos nutrientes del F-12 de Ham. A esta potente mezcla hemos añadido un 5 % de suero fetal bovino (FBS), que aporta factores de crecimiento, hormonas y proteínas fundamentales. • Aditivos a medida: además del FBS, este medio está enriquecido con suplementos esenciales como insulina, transferrina, albúmina sérica bovina, ácido selénico y ácido linoleico. Estas adiciones satisfacen las necesidades celulares específicas, favoreciendo un mayor crecimiento celular, la función metabólica y la salud general. • Aumento de L-glutamina: La presencia de L-glutamina amplifica aún más la eficacia del medio, favoreciendo los procesos metabólicos esenciales y estimulando una proliferación celular robusta. Optimizado para el cultivo celular • Entorno con pH controlado: Al incorporar un sistema tampón de bicarbonato y un indicador de rojo de fenol, el medio garantiza un entorno con pH estable. Está optimizado para una atmósfera con un 5 % de CO₂, lo que permite un control y un ajuste precisos del pH. • Calidad y pureza: Cada lote de medio básico se somete a rigurosas pruebas de esterilidad, micoplasmas y bacterias, lo que garantiza la integridad del medio. Al tratarse de un medio con pH controlado, puede confiar en la calidad y el rendimiento constantes de este medio. Manipulación y almacenamiento Mantenga la calidad del medio almacenándolo refrigerado a una temperatura comprendida entre +2 °C y +8 °C, protegido de la luz. Evite condiciones extremas, como la congelación o el sobrecalentamiento, para preservar su eficacia. Para un uso parcial, caliente suavemente la cantidad necesaria a temperatura ambiente, asegurándose de que el medio alcance las condiciones adecuadas sin comprometer sus componentes. Vida útil Con una vida útil de 8 semanas a partir de la fecha de fabricación, el medio de crecimiento celular NCI-H295R es una opción fiable para sus necesidades de cultivo celular, lo que garantiza la vitalidad y la productividad de su investigación.

€150.00

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PBS

La solución salina tamponada con fosfato (PBS) es una solución tampón muy utilizada en la investigación biológica y química. Desempeña un papel crucial en el mantenimiento del equilibrio del pH y la osmolaridad durante diversos procedimientos experimentales, entre los que se incluyen el procesamiento de tejidos y el cultivo celular. Nuestra solución de PBS está formulada meticulosamente con ingredientes de alta pureza para garantizar la estabilidad y la fiabilidad en cada experimento. La osmolaridad y las concentraciones iónicas de nuestro PBS se asemejan mucho a las del cuerpo humano, lo que la convierte en una solución isotónica y no tóxica para la mayoría de las células. Composición de nuestra solución de PBS Nuestra solución de PBS es una mezcla con pH ajustado de tampones de fosfato de grado ultrapuro y soluciones salinas. A una concentración de trabajo de 1X, contiene: • 8000 mg/L de cloruro de sodio (NaCl) • 200 mg/L de cloruro de potasio (KCl) • 1 150 mg/L de fosfato de sodio dibásico anhidro (Na₂HPO₄) • 200 mg/L de fosfato de potasio monobásico anhidro (KH₂PO₄) Esta composición garantiza un pH y un equilibrio iónico óptimos, adecuados para una amplia gama de aplicaciones biológicas. Aplicaciones de nuestra solución PBS Nuestra solución PBS es ideal para diversas aplicaciones en la investigación biológica. Sus propiedades isotónicas y no tóxicas la hacen adecuada para la dilución de sustancias y el enjuague de recipientes celulares. Las soluciones PBS que contienen EDTA son eficaces para separar células adheridas y aglutinadas. Sin embargo, no deben añadirse metales divalentes, como el zinc, al PBS, ya que esto puede provocar precipitaciones. En tales casos, se recomiendan los tampones de Good. Además, nuestra solución PBS es una alternativa aceptable al medio de transporte viral para el transporte y almacenamiento de virus de ARN, incluido el SARS-CoV-2. Control de calidad • Filtrado estéril Almacenamiento y vida útil • Conservar a una temperatura comprendida entre +2 °C y +25 °C, protegido de la luz. • Una vez abierto, conservar a una temperatura de entre 2 °C y 25 °C y utilizar en un plazo de 24 meses. Condiciones de envío • Temperatura ambiente Conservación • Mantener refrigerado a una temperatura comprendida entre +2 °C y +8 °C, al abrigo de la luz. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37 °C, ya que reduce la calidad del producto. • No caliente el medio por encima de 37 °C ni utilice fuentes de calor no controladas, como los microondas. • Si solo se va a utilizar una parte del medio, extraiga la cantidad necesaria y caliéntela a temperatura ambiente antes de su uso. Composición Categoría Componentes Concentración (mg/L) Sales Cloruro de potasio 200 Fosfato monobásico de potasio anhidro 200 Cloruro de sodio 8000 Fosfato de sodio dibásico anhidro 1150

€20.00

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RPMI 1640, con 2,0 mM de glutamina estable y 2,0 g/L de NaHCO₃

El medio RPMI 1640, también conocido como medio RPMI, es un medio de cultivo celular muy versátil que se utiliza ampliamente en la investigación biológica para cultivar diversas células de mamíferos. Desarrollado por George E. Moore, Robert E. Gerner y H. Addison Franklin en 1966 en el prestigioso Centro Oncológico Integral Roswell Park, este medio debe su nombre a su origen en el Instituto Memorial Roswell Park (RPMI). Diseñado inicialmente para favorecer el crecimiento de células leucémicas humanas tanto en cultivos en suspensión como en monocapa, el medio RPMI 1640 ha evolucionado gracias a las modificaciones realizadas por investigadores y proveedores comerciales hasta convertirse en un medio adecuado para una amplia gama de células de mamíferos. Es excepcionalmente compatible con líneas celulares como HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitos y carcinomas. El medio RPMI 1640 se distingue de otros medios de cultivo celular por su composición única. Contiene una cantidad considerable de fosfato, aminoácidos y vitaminas. En particular, incluye biotina, vitamina B12 y PABA, que no están presentes en el medio mínimo esencial de Eagle ni en el medio de Eagle modificado de Dulbecco. Además, el medio RPMI 1640 presenta concentraciones significativamente elevadas de las vitaminas inositol y colina. Sin embargo, no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento. Por consiguiente, suele ser necesario añadir un 10 % de suero fetal bovino (FBS) para proporcionar las condiciones óptimas para el crecimiento celular. El sistema tampón del medio RPMI 1640 se basa en el bicarbonato de sodio y requiere un ambiente con un 5-10 % de CO₂ para mantener un pH fisiológicamente adecuado. La inclusión del agente reductor glutatión distingue aún más a este medio de los demás. Control de calidad • Filtrado estéril Almacenamiento y vida útil • Conservar a una temperatura de entre +2 °C y +8 °C, protegido de la luz. • Una vez abierto, conservar a 4 °C y utilizar en un plazo de 6 a 8 semanas. Condiciones de envío • Temperatura ambiente Conservación • Mantener refrigerado a una temperatura comprendida entre +2 °C y +8 °C, al abrigo de la luz. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37 °C, ya que reduce la calidad del producto. • No caliente el medio por encima de 37 °C ni utilice fuentes de calor no controladas, como los microondas. • Si solo se va a utilizar una parte del medio, extraiga la cantidad necesaria y caliéntela a temperatura ambiente antes de su uso. Composición Categoría Componentes Concentración (mg/L) Aminoácidos Glicina 10,00 L-alanil-L-glutamina 434,40 L-arginina 200,00 L-asparaginaH₂O 56,82 Ácido L-aspártico 20,00 L-cistina 2HCl 65,20 Ácido L-glutámico 20,00 L-histidina HClH₂O 20,27 L-hidroxi-L-prolina 20,00 L-isoleucina 50,00 L-leucina 50,00 L-lisina HCl 40,00 L-metionina 15,00 L-fenilalanina 15,00 L-prolina 20,00 L-serina 30,00 L-treonina 20,00 L-triptófano 5,00 L-tirosina 2Na2H₂O 28,83 L-valina 20,00 Vitaminas Ácido p-aminobenzoico 1,00 D-biotina 0,20 Cloruro de colina 3,00 Pantotenato de calcio D 0,25 Ácido fólico 1,00 mio-inositol 35,00 Nicotinamida 1,00 Clorhidrato de piridoxina 1,00 Riboflavina 0,20 Clorhidrato de tiamina 1,00 VitaminaB12 0,005 Sales inorgánicas Ca(NO₃)₂·4H₂O 100,00 KCl 400,00 MgSO₄·7H₂O 100,00 NaCl 6000,00 NaHCO₃ 2000,00 Na₂HPO₄ 800,00 Otros componentes D-glucosa 2000,00 L-glutatión reducido 1,00 Sal sódica de rojo fenol 5,30

€25.00

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Stable Glutamin (200mM), L-Alanyl-L-Glutamine Solution

Volume: 100 ml Storage: ≤ –15°C Sterility: Sterile-filtered Stable Glutamine Solution (L-Alanyl-L-Glutamine, 200 mM) is a highly stable dipeptide form of L-glutamine designed as a direct replacement for conventional L-glutamine in cell culture media. L-glutamine is an essential amino acid and a major energy source for cultured cells, playing a critical role in cell growth, metabolism, and protein synthesis. Application and Benefits In standard liquid media, L-glutamine degrades relatively quickly at 37°C, leading to the formation of toxic byproducts such as ammonium ions that can negatively affect cell viability and experimental outcomes. Stable glutamine overcomes this limitation by providing a non-degrading dipeptide form that remains intact in culture conditions. Cells enzymatically cleave the dipeptide bond to release L-glutamine as needed, ensuring a continuous fresh supply while preventing the accumulation of harmful waste products. This makes the solution particularly advantageous for long-term cell cultures and high-density growth systems. Formulation and Usage The L-Alanyl-L-Glutamine solution is prepared in cell culture–grade water at a concentration of 200 mM and is sterile-filtered for contamination-sensitive applications. It can be diluted directly into complete media according to experimental requirements. Store at ≤ –15°C and avoid repeated freeze-thaw cycles to maintain product stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

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Medios de cultivo celular: una visión general

En el ámbito de las ciencias de la vida, una de las metodologías más importantes es el cultivo celular. El término «cultivo celular» hace referencia a la extracción de células, tejidos u órganos de un animal o una planta y a su posterior implantación en un entorno artificial que favorezca su supervivencia y/o crecimiento. Las necesidades ambientales fundamentales para un desarrollo celular óptimo son una temperatura controlada, un sustrato para la adhesión celular, un medio de cultivo adecuado y una incubadora que mantenga el pH y la osmolalidad óptimos. Las células deben contar con estas condiciones para crecer hasta alcanzar su máximo potencial.

La selección de un medio de crecimiento adecuado para el cultivo in vitro es la etapa del cultivo celular que resulta a la vez la más crítica y la más vital. Un medio de crecimiento, también conocido como medio de cultivo, es un líquido o gel formulado para favorecer el desarrollo de organismos a escala microscópica, celular o vegetal. El medio utilizado para cultivar células suele contener un aporte adecuado de energía y sustancias que regulan el ciclo celular. Los componentes principales de un medio de cultivo incluyen aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, glucosa y suero. El suero se añade al medio porque actúa como fuente de factores de crecimiento, hormonas y factores de adhesión. Además de proporcionar nutrientes, el medio también contribuye al mantenimiento de los niveles de pH y osmolalidad.

Tipos de medio utilizados en el cultivo celular

Tanto las células humanas como las animales pueden cultivarse en un medio artificial o sintético, o bien en un medio totalmente natural complementado con elementos naturales. A continuación, te ofrecemos una visión general de los diferentes tipos de medios disponibles en la actualidad.

Medios naturales

En los medios naturales solo se encuentran fluidos biológicos que existen en su estado natural. Los medios naturales son muy útiles y fáciles de utilizar para el cultivo de una amplia variedad de tipos de células animales. La falta de conocimiento sobre los componentes exactos que conforman los medios naturales es el principal factor que contribuye a la baja repetibilidad de los resultados obtenidos con ellos.

Medios artificiales

La preparación de medios artificiales o sintéticos implica la adición de nutrientes (tanto orgánicos como inorgánicos), proteínas séricas, hidratos de carbono, cofactores, vitaminas y sales, así como las fases gaseosas de O₂ y CO₂ [1].

Se han desarrollado diversos tipos de medios artificiales con el fin de cumplir una o varias de las siguientes funciones: 1) Supervivencia inmediata (una solución salina equilibrada con un pH y una presión osmótica precisos). 2) Supervivencia prolongada (una solución salina equilibrada suplementada con diferentes formulaciones de compuestos orgánicos y/o suero). 3) Desarrollo indefinido. 4) Funciones especializadas.

Existen cuatro clasificaciones distintas de los medios artificiales:

Medios que contienen suero

El tipo de suplemento más frecuente en los medios utilizados para el cultivo de células animales es el suero fetal bovino. Se añade al medio de cultivo como suplemento de bajo coste con el fin de lograr las mejores condiciones de crecimiento posibles. Además de actuar como transportador o quelante de nutrientes inestables o insolubles en agua, hormonas y factores de crecimiento, inhibidores de proteasas y otras sustancias, el suero también se une a las moléculas nocivas y las neutraliza.

Medios sin suero

La presencia de suero en los medios presenta una serie de desventajas y puede dar lugar a errores importantes de interpretación en la investigación inmunológica [2, 3]. Se han creado diversos medios sin suero [4, 5]. Estos medios suelen estar formulados específicamente para favorecer el cultivo de un único tipo de célula, como el Knockout Serum Replacement y el Knockout DMEM de Thermo Fisher Scientific, y el medio mTESR de Stem Cell Technologies [6], destinados a células madre [7].

Además, estos medios incorporan cantidades definidas de factores de crecimiento purificados, lipoproteínas y otras proteínas, que, de otro modo, suelen ser aportadas por el suero [8]. A menudo se hace referencia a estos medios como «medios de cultivo definidos», ya que se conocen bien los componentes que los conforman.

Medios químicamente definidos

Estos medios incluyen componentes inorgánicos y orgánicos ultrapuros que no han sufrido ningún tipo de contaminación. También pueden incluir adiciones de proteínas puras, como los factores de crecimiento.

 La modificación genética de bacterias o levaduras, junto con la adición de determinados ácidos grasos, vitaminas, colesterol y aminoácidos, da lugar a la producción de sus componentes [9].

Medios sin proteínas

Los medios sin proteínas son aquellos que no contienen ninguna proteína y, en su lugar, solo incluyen elementos no proteicos. En comparación con los medios con suero añadido, el uso de medios sin proteínas añadidas favorece una mayor proliferación celular y expresión proteica, y facilita la purificación de cualquier producto generado en un proceso posterior [10-12]. Las proteínas no se incluyen en formulaciones como el MEM y el RPMI-1640. No obstante, se puede administrar un suplemento proteico si fuera necesario.

Medios de cultivo y sus componentes básicos

Los medios de cultivo comerciales pueden adquirirse en forma de polvo o de líquido y suelen incluir una variedad de nutrientes, como aminoácidos, glucosa, sales, vitaminas y otros suplementos dietéticos. 

Las necesidades de estos componentes varían según cada línea celular, y estas variaciones son las responsables de la gran variedad de formulaciones de medios existentes. Cada componente desempeña una función determinada, que se describirá en los párrafos siguientes:

Sistemas tampón

Para mantener unas condiciones de crecimiento óptimas, es necesario controlar el pH, lo que suele hacerse mediante uno de estos dos sistemas tampón:

Sistema tampón natural

La proporción de CO₂/H₂CO₃ en la atmósfera es igual a la del medio, lo que crea un mecanismo tampón natural. Para preservar este mecanismo tampón natural, los cultivos deben mantenerse en un ambiente con un 5-10 % de CO₂, lo que suele conseguirse utilizando una incubadora de CO₂. Una de las principales ventajas de utilizar un tampón natural es su bajo coste y su seguridad.

HEPES

El tampón químico que utiliza el ión zwiteriónico HEPES tiene una mayor capacidad tampón en el rango de pH de 7,2-7,4 y no requiere un entorno gaseoso regulado. Para determinados tipos de células, una dosis elevada de HEPES puede resultar perjudicial. Los medios que contienen HEPES son, asimismo, mucho más susceptibles a los efectos fototóxicos de la luz fluorescente [13].

Rojo de fenol

El indicador de pH rojo de fenol suele incluirse en los medios de cultivo disponibles en el mercado, lo que permite un control continuo del pH. A medida que las células se multiplican, los metabolitos que producen provocan un cambio en el pH y, por lo tanto, un cambio de color del medio. El rojo de fenol tiene un doble efecto sobre el color del medio: lo tiñe de amarillo a pH ácido y de púrpura a pH alcalino. Un pH de 7,4, el valor óptimo para el cultivo celular, hace que el medio adquiera un color rojo fluorescente.

Sin embargo, el rojo de fenol presenta algunos inconvenientes: en primer lugar, es capaz de simular la acción de varias hormonas esteroides, principalmente el estrógeno [14]. Por lo tanto, al estudiar células sensibles al estrógeno, como el tejido mamario, se recomienda utilizar un medio sin rojo de fenol. La presencia de rojo de fenol en varias formulaciones sin suero altera el equilibrio sodio-potasio. La adición de suero o de hormona hipofisaria bovina a los medios puede contrarrestar este efecto [15]. En tercer lugar, la presencia de rojo de fenol dificulta la detección en los experimentos de citometría de flujo.

Sales inorgánicas

Los medios que contienen sales inorgánicas, como iones de sodio, potasio y calcio, ayudan a mantener el equilibrio osmótico y a regular el potencial de membrana.

Aminoácidos

Dado que los aminoácidos son los componentes fundamentales de las proteínas, constituyen un componente esencial de todos y cada uno de los medios de cultivo celular que se han concebido. Dado que las células son incapaces de producir ciertos aminoácidos por sí mismas, es importante que el medio de cultivo incluya aminoácidos esenciales. Son necesarios para la proliferación celular, y la concentración en la que están presentes determina la densidad celular máxima que se puede alcanzar. En particular, la L-glutamina, un aminoácido esencial, es especialmente crucial.

La L-glutamina actúa como fuente secundaria de energía para el metabolismo y aporta nitrógeno para la producción de NAD, NADPH y nucleótidos. Dado que la L-glutamina es un aminoácido inestable que, con el tiempo, se transforma en una forma que las células no pueden utilizar, debe añadirse al medio.

Además, se pueden añadir aminoácidos no esenciales al medio para reponer aquellos que se han consumido durante el proceso de crecimiento. El crecimiento de las células se potencia y su viabilidad aumenta cuando el medio de cultivo se complementa con aminoácidos no esenciales.

Hidratos de carbono

Los hidratos de carbono en forma de azúcares son la principal fuente de energía. Muchos de los medios también incluyen maltosa y fructosa, además de los azúcares más comunes, como la glucosa y la galactosa.

Proteínas y péptidos

La albúmina, la transferrina y la fibronectina son las proteínas y los péptidos más utilizados. Son especialmente importantes en los medios que no contienen suero. La albúmina, la transferrina, la aprotinina, la fetuina y la fibronectina son algunas de las proteínas que pueden encontrarse en el suero, que constituye una rica fuente de proteínas.

La albúmina es la principal proteína presente en la sangre, y su función consiste en unir y transportar diversas sustancias —como agua, sales, ácidos grasos libres, hormonas y vitaminas— entre los distintos órganos y células. La capacidad de la albúmina para unirse a sustancias químicas la convierte en una opción eficaz para eliminar compuestos nocivos del medio en el que se cultivan las células.

La aprotinina es un agente protector en los sistemas de cultivo celular, ya que es estable a pH neutro y ácido, además de resistente a las altas temperaturas y a la destrucción que pueden causar las enzimas proteolíticas. Es capaz de inhibir varias proteasas de serina, entre ellas la tripsina, entre otras.

La fetuina es una glicoproteína que puede detectarse en cantidades mayores en el suero de animales fetales y recién nacidos en comparación con el suero de adultos. Además, actúa como inhibidor de las proteasas de serina. La proteína fibronectina es un componente esencial en el proceso de adhesión celular. La transferrina es una proteína que transporta hierro y se encarga de suministrarlo a las membranas celulares.

Ácidos grasos y lípidos

Desempeñan un papel crucial en los medios sin suero cuando este no está presente.

Vitaminas

Son necesarias numerosas vitaminas para el desarrollo y la proliferación celular. Las células no pueden producir vitaminas en cantidades suficientes, por lo que son esenciales en el cultivo de tejidos como suplementos dietéticos.

En el cultivo celular, el suero es la principal fuente de vitaminas; sin embargo, los medios también se enriquecen con diversas vitaminas para adaptarlos a un tipo específico de célula. Lo más habitual es que se utilicen las vitaminas del grupo B para estimular el crecimiento.

Oligoelementos

Los elementos químicos como el cobre, el zinc, el selenio y los intermedios del ciclo del ácido tricarboxílico se conocen como oligoelementos. A menudo se añaden oligoelementos a los medios que no contienen suero para sustituir a los que suelen estar presentes en este. Estos elementos son componentes químicos importantes que se requieren para un desarrollo celular saludable. Muchas reacciones bioquímicas dependen de determinados micronutrientes, como la actividad enzimática.

Suplementos para los medios de cultivo

El medio de crecimiento completo recomendado para determinadas líneas celulares requiere componentes adicionales que no están presentes en los medios de referencia ni en el suero. Estos suplementos dietéticos favorecen el crecimiento celular y el funcionamiento metabólico adecuado.

Aunque las hormonas, los factores de crecimiento y las moléculas de señalización son esenciales para la proliferación adecuada de determinadas líneas celulares, siempre deben tomarse las siguientes precauciones: dado que la adición de suplementos podría alterar la osmolalidad del medio de crecimiento completo, lo que puede inhibir el desarrollo celular, siempre es recomendable verificar la osmolalidad tras añadir los suplementos. Para la mayoría de las líneas celulares, la osmolalidad óptima oscila entre 260 y 320 mOSM/kg.

Antibióticos

Los antibióticos se emplean a menudo para inhibir el desarrollo de contaminantes bacterianos y fúngicos [16], aunque no son esenciales para el crecimiento celular. Dado que los antibióticos podrían enmascarar la contaminación por micoplasmas y bacterias resistentes, no se recomienda su uso rutinario en el cultivo celular [17, 18].

Además, los antibióticos pueden alterar el metabolismo de las células hipersensibles. Se suelen utilizar las combinaciones de penicilina y estreptomicina fabricadas por MilliporeSigma y Life Technologies. La plasmocina se ha utilizado en el cultivo de las líneas celulares de glioma TS603, TS516 y BT260 [19], y se ha demostrado su eficacia para eliminar la contaminación por micoplasmas (20).

Suero

En el suero se encuentran albúminas, factores de crecimiento e inhibidores del crecimiento. El suero es uno de los componentes más importantes del medio de cultivo celular, ya que aporta aminoácidos, proteínas, vitaminas (especialmente las liposolubles, como la A, la D, la E y la K), hidratos de carbono, lípidos, hormonas, factores de crecimiento, minerales y oligoelementos.

A menudo se utiliza suero de origen fetal y de ternera para favorecer el desarrollo de las células en cultivo. El suero fetal es una fuente abundante de factores de crecimiento y resulta adecuado para la clonación celular y el desarrollo de células sensibles. Debido a su menor capacidad para promover el crecimiento, el suero de ternera se emplea en experimentos de inhibición por contacto. Los medios de cultivo normales suelen contener entre un 2 % y un 10 % de suero. La adición de suero al medio de cultivo tiene los siguientes fines [21]:

  • El suero aporta los nutrientes esenciales para las células (tanto en solución como unidos a proteínas).

  • El suero contiene varios factores de crecimiento y hormonas que intervienen en la promoción del crecimiento y en la actividad celular especializada.

  • Aporta numerosas proteínas de unión, como la albúmina y la transferrina, que transportan otras sustancias químicas al interior de la célula. Por ejemplo, la albúmina transporta grasas, vitaminas, hormonas, etc., a las células.

  • También aporta proteínas, como la fibronectina, que aumentan la adhesión celular al sustrato. Además, produce elementos de extensión que favorecen la expansión celular antes de la división.

  • Aporta inhibidores de proteasas que impiden la proteólisis en las células.

  • También contiene minerales como Na+, K+, Zn2+ y Fe2+.

  • Aumenta la viscosidad del medio, protegiendo así a las células de lesiones mecánicas durante la agitación del cultivo en suspensión.

  • Además, actúa como tampón.

Referencias

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrición de células animales en cultivo tisular; estudios iniciales sobre un medio sintético. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rápida adsorción de un componente del suero fetal bovino por parte de células de mamíferos en cultivo. Una posible fuente de artefactos en los estudios de antisueros contra antígenos específicos de células. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. La adición de suero al medio utilizado para la preparación de suspensiones celulares como posible fuente de artefactos en reacciones mediadas por células estudiadas mediante la prueba del ganglio linfático poplíteo. J Immunogenet. 1980;7:483-9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Medios comerciales sin suero: crecimiento de hibridomas y producción de anticuerpos monoclonales. J Immunol Methods. 1991;145:175-83

[5] Barnes D, Sato G. Métodos para el crecimiento de células en cultivo en medio sin suero. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vázquez Sánchez S, Tapia O, et al. Las proteínas chaperonas HSP70 transportan la TDP-43, libre de ARN, a caparazones esféricas líquidas intranucleares anisotrópicas. Science. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, et al. La senescencia inducida por el síndrome de Down altera la arquitectura nuclear de los progenitores neurales. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Sustitución completa del suero por albúmina, transferrina y lípidos de soja en cultivos de linfocitos B reactivos a lipopolisacáridos. J Exp Med. 1978;147:923-33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Mejora sistemática de un medio químicamente definido y libre de proteínas para el crecimiento de hibridomas y la producción de anticuerpos monoclonales. J Biotechnol. 1996;45:111-23

[10] Darfler F. Un medio libre de proteínas para el crecimiento de hibridomas y otras células del sistema inmunitario. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78

[11] Barnes D, Sato G. Cultivo celular sin suero: un enfoque unificador. Cell. 1980;22:649-55

[12] Hamilton W, Ham R. Crecimiento clonal de líneas celulares de hámster chino en medios sin proteínas. In Vitro. 1977;13:537-47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Análisis de los efectos citotóxicos de un medio de cultivo que contiene HEPES expuesto a la luz. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. El rojo de fenol presente en los medios de cultivo tisular es un estrógeno débil: implicaciones para el estudio de células sensibles a los estrógenos en cultivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500

[15] Karmiol S. Desarrollo de medios sin suero. En: Master JRW, editor. Cultivo de células animales, 3.ª ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Uso de antibióticos en los medios de cultivo celular. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Propagación y control de la infección por micoplasmas en cultivos celulares. In Vitro. 1976;12:643-8

[18] Masters J, Stacey G. Cambio de medio y pases de líneas celulares. Nat Protoc. 2007;2:2276-84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M, et al. La desmetilasa de histonas KDM6A detecta directamente el oxígeno para controlar la cromatina y el destino celular. Science. 2019;363:1217-1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M, et al. Eficacia de Plasmocin™ en diversas líneas celulares de mamíferos infectadas por mollicutes en comparación con los antibióticos de uso habitual en cultivos celulares: una experiencia local. Cytotechnology. 2011;63:609-20

[21] Kragh Hansen U. Aspectos moleculares de la unión de ligandos a la albúmina sérica. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53