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FS-C3H

Cell line · Número de producto 400418

The FS-C3H cell line, derived from the C3H/HeJ mouse strain, plays a pivotal role in studying host responses to endotoxins, particularly in the context of...

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01Información general

Descripción

La línea celular FS-C3H, derivada de la cepa de ratones C3H/HeJ, desempeña un papel fundamental en el estudio de las respuestas del huésped a las endotoxinas, especialmente en el contexto de la investigación sobre el cáncer. Esta cepa destaca por su resistencia a la endotoxina debido a una insensibilidad específica al lipopolisacárido (LPS), uno de los principales componentes de la endotoxina bacteriana. Esta característica ha convertido a la FS-C3H en un modelo inestimable para diseccionar las vías bioquímicas y genéticas implicadas en la regulación de la respuesta inmunitaria. Los investigadores han utilizado ampliamente esta línea celular para examinar la dinámica de los linfocitos B y los macrófagos, centrándose en su singular falta de respuesta al LPS, que contrasta con las reacciones típicas de las células inmunitarias a tales estímulos.

La falta de respuesta de las células FS-C3H al LPS se atribuye a la ausencia o alteración de un receptor crucial responsable de la transducción de señales de LPS. Los estudios han demostrado que, a pesar de la no reactividad al LPS, estas células pueden activarse a través de vías alternativas, como los mecanismos de señalización de la proteína quinasa C (PKC) y la tirosina quinasa, similares a los activados en las células que responden al LPS. La interacción y las funciones reguladoras de estas quinasas en las vías de señalización ponen de manifiesto mecanismos intracelulares complejos, lo que sugiere que las vías de la PKC y la tirosina quinasa podrían compensar la señalización defectuosa del LPS. Esta observación abre vías para explorar cómo la fosforilación modulada por la tirosina cinasa afecta a las respuestas celulares globales en estos ratones.

Es fundamental seguir investigando en las células FS-C3H para comprender la base molecular de su hipersensibilidad al LPS, potencialmente vinculada a un defecto genético en el gen Lpsn. Profundizando en los perfiles de fosforilación de estas células en comparación con las que responden al LPS, los científicos pretenden desentrañar los defectos moleculares específicos que conducen a la alteración de la activación génica y las respuestas de proliferación. El aislamiento y la caracterización del producto génico responsable de la interacción con el LPS podrían aportar conocimientos más profundos sobre las disfunciones del sistema inmunitario y allanar el camino para nuevos enfoques terapéuticos en el tratamiento de trastornos inmunitarios e inflamatorios relacionados.

Pañuelo de papel
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Fibrosarcoma

02Clasificación

Organismo
Ratón
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Identificadores

Referencia
FS-C3H (número de catálogo de Cytion 400418)
N.º de identificación fiscal del NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5755

04Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM, w: 4,5 g/L de glucosa, w: 4 mM de L-glutamina, w: 3,7 g/L de NaHCO3, w: 1,0 mM de piruvato sódico (número de artículo de Cytion 820300a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
2 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

06Donante

Raza / subespecie
C3H