Siirry sisältöön
FS-C3H
Kudos
Iho
Sairaus
Fibrosarkooma

Asiakirjat

FS-C3H

Cell line · Tuotenumero 400418

The FS-C3H cell line, derived from the C3H/HeJ mouse strain, plays a pivotal role in studying host responses to endotoxins, particularly in the context of...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

C3H/HeJ-hiirikannasta peräisin oleva FS-C3H-solulinja on keskeisessä asemassa tutkittaessa isännän vasteita endotoksiineille erityisesti syöpätutkimuksen yhteydessä. Tämä kanta on tunnettu endotoksiiniresistenssistään, joka johtuu erityisestä epäherkkyydestä lipopolysakkaridille (LPS), joka on bakteerien endotoksiinin pääkomponentti. Tämä ominaisuus on tehnyt FS-C3H:sta korvaamattoman arvokkaan mallin immuunivasteen säätelyyn liittyvien biokemiallisten ja geneettisten reittien tutkimiseen. Tutkijat ovat käyttäneet tätä solulinjaa laajalti B-lymfosyyttien ja makrofagien dynamiikan tutkimiseen keskittyen niiden ainutlaatuiseen reagoimattomuuteen LPS:lle, joka poikkeaa tyypillisistä immuunisolujen reaktioista tällaisiin ärsykkeisiin.

FS-C3H-solujen reagoimattomuus LPS:lle johtuu LPS-signaalin välittämisestä vastaavan ratkaisevan reseptorin puuttumisesta tai muuttumisesta. Tutkimukset ovat osoittaneet, että vaikka nämä solut eivät reagoi LPS:ään, ne voivat aktivoitua vaihtoehtoisten reittien, kuten proteiinikinaasi C:n (PKC) ja tyrosiinikinaasien signaalimekanismien, kautta, jotka ovat samanlaisia kuin ne, jotka aktivoituvat LPS:ään reagoivissa soluissa. Näiden kinaasien vuorovaikutus ja säätelytehtävät signaalireiteissä korostavat monimutkaisia solunsisäisiä mekanismeja, mikä viittaa siihen, että PKC- ja tyrosiinikinaasireitit voisivat kompensoida puutteellista LPS-signalointia. Tämä havainto avaa mahdollisuuksia tutkia, miten tyrosiinikinaasimoduloitu fosforylaatio vaikuttaa yleisiin soluvasteisiin näissä hiirissä.

FS-C3H-solujen jatkotutkimus on ratkaisevan tärkeää, jotta voidaan ymmärtää niiden LPS-hyporesponsiivisuuden molekulaarinen perusta, joka mahdollisesti liittyy geneettiseen vikaan Lpsn-geenissä. Tutkijat pyrkivät selvittämään ne erityiset molekyylivirheet, jotka johtavat geenien muuttuneeseen aktivoitumiseen ja proliferaatiovasteisiin, tutkimalla näiden solujen fosforylaatioprofiileja verrattuna LPS-vasteisiin. LPS-vuorovaikutuksesta vastaavan geenituotteen eristäminen ja karakterisointi voisi tarjota syvällisempää tietoa immuunijärjestelmän toimintahäiriöistä ja tasoittaa tietä uusille terapeuttisille lähestymistavoille niihin liittyvien immuuni- ja tulehdussairauksien hoidossa.

Kudos
Iho
Sairaus
Fibrosarkooma

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Tunnisteet

Lähdeviite
FS-C3H (Cytionin luettelonumero 400418)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_5755

04Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
2 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

06Lahjoittaja

Rotua / alalajia
C3H