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FS-C3H
Tecido
Pele
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Fibrossarcoma

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FS-C3H

Cell line · Número do produto 400418

The FS-C3H cell line, derived from the C3H/HeJ mouse strain, plays a pivotal role in studying host responses to endotoxins, particularly in the context of...

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01Informações gerais

Descrição

A linha de células FS-C3H, derivada da estirpe de ratinhos C3H/HeJ, desempenha um papel fundamental no estudo das respostas do hospedeiro às endotoxinas, nomeadamente no contexto da investigação sobre o cancro. Esta estirpe é notável pela sua resistência à endotoxina devido a uma insensibilidade específica ao lipopolissacárido (LPS), um dos principais componentes da endotoxina bacteriana. Esta caraterística fez do FS-C3H um modelo inestimável para dissecar as vias bioquímicas e genéticas envolvidas na regulação da resposta imunitária. Os investigadores utilizaram extensivamente esta linha celular para examinar a dinâmica dos linfócitos B e dos macrófagos, concentrando-se na sua não reatividade única ao LPS, que contrasta com as reacções típicas das células imunitárias a tais estímulos.

A não-responsividade das células FS-C3H ao LPS é atribuída à ausência ou alteração de um recetor crucial responsável pela transdução de sinal do LPS. Estudos têm demonstrado que, apesar da não reatividade ao LPS, estas células podem ser activadas através de vias alternativas como a proteína quinase C (PKC) e mecanismos de sinalização de tirosina quinase, semelhantes aos activados em células responsivas ao LPS. A interação e os papéis reguladores destas cinases nas vias de sinalização evidenciam mecanismos intracelulares complexos, sugerindo que as vias da PKC e da tirosina cinase poderiam compensar a sinalização deficiente do LPS. Esta observação abre caminhos para explorar a forma como a fosforilação modulada por tirosina quinase afecta as respostas celulares globais nestes ratos.

A continuação da investigação nas células FS-C3H é fundamental para compreender a base molecular da sua hiporesponsividade ao LPS, potencialmente ligada a um defeito genético no gene Lpsn. Ao analisar os perfis de fosforilação destas células em comparação com as que respondem a LPS, os cientistas pretendem desvendar os defeitos moleculares específicos que levam a respostas alteradas de ativação e proliferação de genes. O isolamento e a caraterização do produto genético responsável pela interação com o LPS podem fornecer conhecimentos mais profundos sobre as disfunções do sistema imunitário e abrir caminho a novas abordagens terapêuticas no tratamento de doenças imunitárias e inflamatórias relacionadas.

Tecido
Pele
Doença
Fibrossarcoma

02Classificação

Organismo
Rato
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Identificadores

Referência
FS-C3H (número de catálogo Cytion 400418)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5755

04Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

06Doador

Raça / subespécie
C3H