Siirry sisältöön
F9
Kudos
Kivekset
Sairaus
Teratokarsinooma

Asiakirjat

F9

Cell line · Tuotenumero 400174

The F9 cell line, a murine embryonal carcinoma model derived from a testicular teratoma of the C57BL/6 mice, serves as an important tool in developmental ...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

F9-solulinja, C57BL/6-hiirten kivesten teratoomasta peräisin oleva hiiren alkion karsinoomamalli, on tärkeä väline kehitysbiologiassa ja embryologiassa. F9-solut kykenevät erilaistumaan parietaaliseksi endodermiksi, kun ne altistetaan retinohapolle ja dibutyylisykliselle AMP:lle (cAMP). Tämä erilaistuminen näkyy merkittävinä muutoksina solujen käyttäytymisessä ja proteiinien ilmentymisessä, mukaan lukien plasminogeeniaktivaattorin, laminiinin ja tyypin IV kollageenin synteesi. Nämä proteiinit ovat ratkaisevan tärkeitä kudoksen kehityksen ja matriisin muodostumisen prosessien ymmärtämiseksi alkion varhaisvaiheissa.

On huomattava, että cAMP:n tehokkuus F9-solujen erilaistumisen indusoimisessa on riippuvainen edeltävästä retinohappokäsittelystä, mikä osoittaa näiden signaalimolekyylien monimutkaista vuorovaikutusta kehityspolkujen käynnistämisessä. Lisäksi F9-soluille on ominaista, että niillä on kolme kopiota beeta 1 -integriinigeenistä, mikä saattaa vaikuttaa solujen tarttumiseen ja liikkuvuuteen, mikä korostaa entisestään niiden hyödyllisyyttä solujen vuorovaikutusten ja solunulkoisen matriisin koostumuksen tutkimisessa. Näiden solujen turvallisuusprofiileihin kuuluu ektromelia-viruksen (hiiren rokon) testaus, jonka osalta ne ovat osoittautuneet negatiivisiksi, mikä takaa niiden soveltuvuuden monenlaisiin kokeellisiin sovelluksiin ilman viruskontaminaation riskiä.

Kudos
Kivekset
Sairaus
Teratokarsinooma

02Luokittelu

Organismi
Hiiri
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen

04Tunnisteet

Lähdeviite
F9 (Cytionin luettelonumero 400174)
NCBI-verotunnus
10090
Cellosaurus
CVCL_0259

05Ilmentyminen ja alttius

Virukset
MAP-testi negatiivinen: Theilerin GD VII, Toolanin H-1, MHV, LDV, RCV/SDA, M-Adenovirus, B.piliformis.
Tuotteet
Plasminogeeniaktivaattori, laminiini, tyyppi IV kollageeni

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
Päällystä soluviljelypullot gelatiinilla. 1 x 104 solua/cm2 tuottaa yhtenäisen kerroksen noin 4 päivässä.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
129/Sv
Luovuttajan ikä
Alkio