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F9
Tecido
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Doença
Teratocarcinoma

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F9

Cell line · Número do produto 400174

The F9 cell line, a murine embryonal carcinoma model derived from a testicular teratoma of the C57BL/6 mice, serves as an important tool in developmental ...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular F9, um modelo de carcinoma embrionário murino derivado de um teratoma testicular de ratinhos C57BL/6, serve como uma ferramenta importante na biologia do desenvolvimento e na embriologia. As células F9 são capazes de se diferenciar em endoderme parietal quando expostas ao ácido retinóico e ao AMP cíclico dibutiril (cAMP). Esta diferenciação é marcada por alterações significativas no comportamento celular e na expressão proteica, incluindo a síntese do ativador do plasminogénio, da laminina e do colagénio tipo IV. Estas proteínas são cruciais para a compreensão dos processos de desenvolvimento dos tecidos e da formação da matriz nas fases embrionárias iniciais.

É de notar que a eficácia do AMPc na indução da diferenciação em células F9 está condicionada ao tratamento prévio com ácido retinóico, o que indica uma interação complexa entre estas moléculas de sinalização no desencadeamento de vias de desenvolvimento. Além disso, as células F9 caracterizam-se por terem três cópias do gene da integrina beta 1, o que pode influenciar a adesão e a mobilidade das células, sublinhando ainda mais a sua utilidade no estudo das interações celulares e da composição da matriz extracelular. O perfil de segurança destas células inclui testes para o vírus da ectromelia (varíola do rato), para o qual foram consideradas negativas, garantindo a sua adequação a uma vasta gama de aplicações experimentais sem o risco de contaminação viral.

Tecido
Testículo
Doença
Teratocarcinoma

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial

04Identificadores

Referência
F9 (número de catálogo Cytion 400174)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0259

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
Teste de MAP negativo: Sendai, Ektromelie, Polyoma, K-Virus, Kilham, Reo 3, PVM, LCM, M.pulmonis, MVM, Theiler's GD VII, Toolan's H-1, MHV, LDV, RCV/SDA, M-Adenovirus, B.piliformis.
Produtos
Ativador do plasminogénio, laminina, colagénio de tipo IV

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Revestir frascos de cultura celular com gelatina. 1 x 104 células/cm² produzirão uma camada confluente em cerca de 4 dias.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
129/Sv
Idade do dador
Embrião