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Celle HROHep03
Tessuto
Fegato
Malattia
Adenocarcinoma primario, stadio T0NxMx, grado 3
Sito metastatico
Non applicabile (stadio TNM T0NxMx; nessuna metastasi a distanza confermata al momento del prelievo del campione)

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Celle HROHep03

Cell line · Codice prodotto 300197

HROHep03 è una linea cellulare di adenocarcinoma epatocellulare umano ottenuta da un tumore epatico primario di una paziente caucasica di 71 anni nell'ambito del...

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01Informazioni generali

Descrizione

HROHep03 è una linea cellulare di adenocarcinoma epatocellulare umano ottenuta da un tumore epatico primario di una paziente caucasica di 71 anni, appartenente alla serie della biobanca HRO di linee cellulari tumorali derivate da pazienti, sviluppata dal PD Dr. Michael Linnebacher a partire dal 2006. Il tumore è stato classificato come adenocarcinoma primario allo stadio TNM T0NxMx, grado 3, corrispondente a un adenocarcinoma epatico di alto grado senza metastasi a distanza confermate al momento del prelievo del tessuto. HROHep03 cresce come monostrato aderente con morfologia di tipo fibroblastico ed è stato confermato privo di virus patogeni per l’uomo quali HBV, HCV e HIV, in linea con i rigorosi standard di controllo di qualità della serie della biobanca di Linnebacher.

HROHep03 è applicabile nella ricerca sull’adenocarcinoma epatocellulare, negli studi sulla biologia delle cellule tumorali epatiche di alto grado, nei test di sensibilità e resistenza ai farmaci (sorafenib, cisplatino, 5-FU), nei test di invasione e migrazione dei tumori epatici e nell’analisi delle vie molecolari. Come parte della biobanca HRO, questa linea fornisce una risorsa biologica specifica per paziente che può essere abbinata a materiale immunologico corrispondente proveniente dallo stesso paziente per la ricerca oncologica personalizzata. La sua morfologia di tipo fibroblastico la distingue fenotipicamente dalle più comuni linee di HCC di tipo epatocitario e può riflettere caratteristiche di transizione epiteliale-mesenchimale acquisite durante la progressione tumorale o l’adattamento in vitro.

Tessuto
Fegato
Malattia
Adenocarcinoma primario, stadio T0NxMx, grado 3
Sito metastatico
Non applicabile (stadio TNM T0NxMx; nessuna metastasi a distanza confermata al momento del prelievo del campione)
Applicazioni
Ricerca sull’adenocarcinoma epatocellulare; modellizzazione dell’HCC di alto grado; test di sensibilità ai farmaci (sorafenib, cisplatino, 5-FU); invasione e migrazione dei tumori epatici; studi su biobanche HRO abbinate ai pazienti

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
Senza OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
No genetic modification; wildtype patient-derived hepatic adenocarcinoma cell line established by PD Dr. Linnebacher. Confirmed free of HBV, HCV, HIV.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile a un fibroblasto
Tipo di cellula
Di tipo fibroblastico (carcinoma epatocellulare)
Tempo di raddoppio
da circa 48 a 72 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HROHep03 (numero di catalogo Cytion 300197)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2U72

05Espressione e suscettibilità

Virus
Privo di virus patogeni umani HBV, HCV, HIV.

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3-5 giorni
Recupero post-scongelamento
2 giorni
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
71 anni
Etnia
Caucasico