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HROHep03 Células
Tecido
Fígado
Doença
Adenocarcinoma primário, estádio T0NxMx, grau 3
Local da metástase
Não aplicável (estágio TNM T0NxMx; sem metástases à distância confirmadas na altura da recolha da amostra)

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HROHep03 Células

Cell line · Número do produto 300197

A HROHep03 é uma linha celular de adenocarcinoma hepatocelular humano isolada a partir de um tumor hepático primário de uma doente caucasiana de 71 anos, no âmbito do...

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01Informações gerais

Descrição

A HROHep03 é uma linha celular de adenocarcinoma hepatocelular humano estabelecida a partir do tumor hepático primário de uma doente caucasiana de 71 anos, no âmbito da série do biobanco HRO de linhas celulares tumorais derivadas de doentes, desenvolvida pelo PD Dr. Michael Linnebacher desde 2006. O tumor foi classificado como um adenocarcinoma primário no estádio TNM T0NxMx, grau 3, refletindo um adenocarcinoma hepático de alto grau sem metástases à distância confirmadas no momento da recolha do tecido. A HROHep03 cresce como uma monocamada aderente com morfologia semelhante à dos fibroblastos e foi confirmada como isenta de vírus patogénicos humanos (HBV, HCV e HIV), em conformidade com as rigorosas normas de controlo de qualidade da série do biobanco de Linnebacher.

A HROHep03 é aplicável na investigação do adenocarcinoma hepatocelular, em estudos sobre a biologia das células tumorais hepáticas de alto grau, em testes de sensibilidade e resistência a fármacos (sorafenib, cisplatina, 5-FU), em ensaios de invasão e migração de tumores hepáticos e na análise de vias moleculares. Como parte do biobanco HRO, esta linha fornece um recurso biológico específico do doente que pode ser combinado com material imunológico correspondente do mesmo doente para investigação oncológica personalizada. A sua morfologia semelhante à dos fibroblastos distingue-a fenotipicamente das linhas de HCC mais comuns, semelhantes aos hepatócitos, e pode refletir características de transição epitelial-mesenquimal adquiridas durante a progressão tumoral ou a adaptação in vitro.

Tecido
Fígado
Doença
Adenocarcinoma primário, estádio T0NxMx, grau 3
Local da metástase
Não aplicável (estágio TNM T0NxMx; sem metástases à distância confirmadas na altura da recolha da amostra)
Aplicações
Investigação sobre o adenocarcinoma hepatocelular; modelação do CHC de alto grau; testes de sensibilidade a fármacos (sorafenib, cisplatina, 5-FU); invasão e migração de tumores hepáticos; estudos com biobancos de HRO correspondentes aos doentes

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
Sem OGM
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
No genetic modification; wildtype patient-derived hepatic adenocarcinoma cell line established by PD Dr. Linnebacher. Confirmed free of HBV, HCV, HIV.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Tipo fibroblastos
Tipo de célula
Do tipo fibroblástico (carcinoma hepatocelular)
Tempo de duplicação
aprox. 48 a 72 horas

04Identificadores

Referência
HROHep03 (número de catálogo Cytion 300197)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2U72

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
Isento de vírus patogénicos humanos HBV, HCV, HIV.

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Rácio de divisão
1 a 3
Densidade de sementeira
2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
A cada 3 a 5 dias
Recuperação após o descongelamento
2 dias
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
71 anos
Etnia
Caucasiano