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EFM-19
Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma duttale della mammella
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
EFM19

Documenti

EFM-19

Cell line · Codice prodotto 305540

L'EFM-19 è una linea cellulare di carcinoma mammario umano con recettori degli estrogeni positivi (ER+) che è stata utilizzata per studiare gli effetti degli estrogeni e degli antiestrogeni...

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01Informazioni generali

Descrizione

EFM-19 è una linea cellulare di carcinoma mammario umano positivo al recettore degli estrogeni (ER+) che è stata utilizzata per studiare gli effetti degli estrogeni e degli antiestrogeni, come il tamoxifene, sull'espressione genica. Questa linea cellulare mostra una forte risposta alla stimolazione estrogenica, che modula l'espressione di vari RNA regolati dagli estrogeni. In particolare, le cellule EFM-19 esprimono livelli più elevati di mRNA del recettore degli estrogeni rispetto ad altre linee cellulari di carcinoma mammario come la MCF-7.

La ricerca su EFM-19 ha messo in evidenza il suo profilo unico di espressione degli RNA regolati dagli estrogeni. Ad esempio, è stato dimostrato che RNA quali pNR-1, pNR-2, pNR-25 e pNR-100 sono indotti dall’estradiolo. Tale induzione varia da moderata (3 volte per pNR-100) a significativa (oltre 100 volte per pNR-2). È interessante notare che la risposta di questi RNA al tamoxifene varia; mentre il tamoxifene agisce come agonista parziale degli estrogeni per alcuni RNA (ad esempio, pNR-1), la sua efficacia è inferiore per altri (ad esempio, pNR-2). Questa linea cellulare è quindi preziosa per lo studio degli effetti differenziali degli estrogeni e degli antiestrogeni sulla regolazione genica.

Le cellule EFM-19 si distinguono anche per la loro applicazione nella ricerca volta a esplorare i ruoli più ampi degli estrogeni nella biologia del cancro al seno. I loro profili di espressione contribuiscono a comprendere in che modo gli estrogeni e la segnalazione dei recettori degli estrogeni influenzano la tumorigenesi e le risposte al trattamento. Questa linea cellulare, insieme ad altre come la MCF-7, aiuta a svelare i meccanismi guidati dagli estrogeni, fornendo potenzialmente informazioni utili per le strategie terapeutiche che includono interventi basati sugli ormoni.

Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma duttale della mammella
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
  • EFM19

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
EFM-19 (codice catalogo Cytion 305540)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0253

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
HER2+, ER++, AR++, PR++
Profilo mutazionale
Mutazione: PIK3CA, p.His1047Leu (c.3140A>T), omozigote; Mutazione: TP53, p.His193Arg (c.578A>G), omozigote

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 20% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
Dividere la coltura confluente 2 volte alla settimana.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
50 anni