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Cellule KG-1a
Tessuto
Midollo osseo
Malattia
Leucemia mieloide acuta
Sinonimi
KG-1A, KG1A, KG1a

Documenti

Cellule KG-1a

Cell line · Codice prodotto 300234

La linea cellulare KG-1a è una sottolinia derivata dalla linea cellulare originale KG-1, ottenuta dal midollo osseo di un paziente a cui era stata diagnosticata una leucemia acuta...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare KG-1a è una sotto-linea derivata dalla linea cellulare originale KG-1, ottenuta dal midollo osseo di un paziente con diagnosi di leucemia mieloide acuta (AML). Le cellule KG-1a sono classificate come linea cellulare di leucemia mieloide umana e sono particolarmente caratterizzate dal loro stato immaturo e indifferenziato. A differenza delle cellule parentali KG-1, che sono principalmente allo stadio di mieloblasto, le cellule KG-1a mostrano un fenotipo più primitivo, che assomiglia ai primi progenitori mieloidi o addirittura alle cellule staminali. Ciò le rende uno strumento prezioso per lo studio dell'emopoiesi, della progressione della leucemia e dei meccanismi molecolari alla base del differenziamento mieloide.

Le cellule KG-1a esprimono vari marcatori di superficie tipici dei progenitori ematopoietici precoci, come CD34, CD38 e HLA-DR, mentre mancano di marcatori associati alle cellule mieloidi mature. Questo profilo le rende molto adatte alla ricerca sulla biologia delle cellule staminali e allo sviluppo di terapie contro la leucemia. Inoltre, le cellule KG-1a sono spesso utilizzate in saggi di screening farmacologico per valutare l'efficacia di potenziali composti antileucemici, in particolare quelli che hanno come bersaglio le cellule staminali leucemiche. La loro capacità di mantenere uno stato indifferenziato in vitro fornisce anche un modello robusto per studi di espressione genica e saggi funzionali relativi alla patogenesi della leucemia.

Come altre linee cellulari derivate da tessuti umani, le cellule KG-1a sono destinate esclusivamente alla ricerca e non sono adatte per applicazioni terapeutiche o in vivo. Richiedono un'attenta manipolazione in condizioni di sterilità e le loro caratteristiche di crescita richiedono condizioni di coltura specifiche, tra cui l'uso di terreno RPMI-1640 integrato con siero fetale bovino. I ricercatori che utilizzano la linea cellulare KG-1a possono acquisire importanti conoscenze sulle prime fasi della trasformazione leucemica e sul ruolo dei progenitori ematopoietici nella biologia del cancro.

Tessuto
Midollo osseo
Malattia
Leucemia mieloide acuta
Sinonimi
  • KG-1A
  • KG1A
  • KG1a

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Mieloblasto
Tempo di raddoppio
45 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KG-1a (numero di catalogo Cytion 300234)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1824

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
HLA A30, A31, B35, Cw4
Isoenzimi
G6PD, B, PGM1, 1-2, PGM3, 0, ES-D, 1, Me-2, 1, AK-1, 0, GLO-1, 2
Virus
EBNA (EBNA ): negativo
Trascriptasi inversa
Negativo

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
IMDM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 25 mM di HEPES, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 3,024 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820800a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Trasferire la sospensione cellulare in provette da centrifuga sterili. Raccogliere le cellule centrifugando a 300xg per 3 minuti. Eliminare il surnatante e risospendere le cellule pellettate in terreno di coltura cellulare fresco. Regolare la densità cellulare ottimale tra 1 e 3 x 105 cellule/ml. Dividere le cellule quando si raggiunge una densità cellulare massima di 1 - 2 x 106 cellule/ml.
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3 giorni
Recupero post-scongelamento
Lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
59 anni
Etnia
Caucasico