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Células KG-1a
Tecido
Medula óssea
Doença
Leucemia mielogénica aguda
Sinónimos
KG-1A, KG1A, KG1a

Documentos

Células KG-1a

Cell line · Número do produto 300234

A linha celular KG-1a é uma sublinha derivada da linha celular KG-1 original, que foi estabelecida a partir da medula óssea de um doente com diagnóstico de leucemia aguda...

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01Informações gerais

Descrição

A linha de células KG-1a é uma sub-linha derivada da linha de células KG-1 original, que foi estabelecida a partir da medula óssea de um doente a quem foi diagnosticada leucemia mieloide aguda (LMA). As células KG-1a são classificadas como uma linha celular de leucemia mieloide humana e são particularmente caracterizadas pelo seu estado imaturo e indiferenciado. Ao contrário das células progenitoras KG-1, que se encontram principalmente na fase de mieloblasto, as células KG-1a apresentam um fenótipo mais primitivo, assemelhando-se a progenitores mieloides iniciais ou mesmo a células estaminais. Este facto torna-as uma ferramenta inestimável para o estudo da hematopoiese, da progressão da leucemia e dos mecanismos moleculares subjacentes à diferenciação mieloide.

As células KG-1a expressam vários marcadores de superfície típicos dos progenitores hematopoiéticos iniciais, tais como CD34, CD38 e HLA-DR, mas não possuem marcadores associados a células mielóides maduras. Este perfil torna-as altamente adequadas para a investigação da biologia das células estaminais e para o desenvolvimento de terapias para a leucemia. Além disso, as células KG-1a são frequentemente utilizadas em ensaios de despistagem de fármacos para avaliar a eficácia de potenciais compostos anti-leucémicos, em especial os que visam as células estaminais leucémicas. A sua capacidade de manter um estado indiferenciado in vitro também proporciona um modelo robusto para estudos de expressão genética e ensaios funcionais relacionados com a patogénese da leucemia.

Tal como acontece com outras linhas celulares derivadas de tecidos humanos, as células KG-1a destinam-se apenas a utilização em investigação e não são adequadas para aplicações terapêuticas ou in vivo. Exigem um manuseamento cuidadoso em condições estéreis e as suas caraterísticas de crescimento requerem condições de cultura específicas, incluindo a utilização de meio RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino. Os investigadores que utilizam a linha celular KG-1a podem obter informações significativas sobre as fases iniciais da transformação leucémica e o papel dos progenitores hematopoiéticos na biologia do cancro.

Tecido
Medula óssea
Doença
Leucemia mielogénica aguda
Sinónimos
  • KG-1A
  • KG1A
  • KG1a

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Suspensão
Nível de biossegurança
1

03Características

Tipo de célula
Mieloblastos
Tempo de duplicação
45 horas

04Identificadores

Referência
KG-1a (número de catálogo Cytion 300234)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1824

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
HLA A30, A31, B35, Cw4
Isoenzimas
G6PD, B, PGM1, 1-2, PGM3, 0, ES-D, 1, Me-2, 1, AK-1, 0, GLO-1, 2
Vírus
EBNA (EBNA ): negativo
Transcriptase reversa
Negativo

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
IMDM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-glutamina, com: 25 mM de HEPES, com: 1,0 mM de piruvato de sódio, com: 3,024 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820800a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Subcultura
Transfira a suspensão celular para tubos de centrifugação estéreis. Recolha as células centrifugando a 300xg durante 3 minutos. Descarte o sobrenadante e ressuspende as células sedimentadas em meio de cultura celular fresco. Ajuste para uma densidade celular ideal entre 1 e 3 x 105 células/ml. Divida as células quando for atingida uma densidade celular máxima de 1 a 2 x 106 células/ml.
Renovação de fluidos
A cada 3 dias
Recuperação após o descongelamento
Deixar as células recuperarem do processo de congelação durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
59 anos
Etnia
Caucasiano