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MV3
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma amelanotico
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
MV-3, MV 3

Documenti

MV3

Cell line · Codice prodotto 305495

La linea cellulare MV3 è un modello di melanoma umano ottenuto da un linfonodo metastatico di un paziente di sesso maschile affetto da melanoma amelanotico. Questa linea cellulare è altamente ...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare MV3 è un modello di melanoma umano ottenuto da un linfonodo metastatico di un paziente di sesso maschile affetto da melanoma amelanotico. Questa linea cellulare è altamente metastatica e tumorigenica, il che la rende una risorsa fondamentale per lo studio della progressione e delle metastasi del melanoma. Le cellule MV3 mostrano significative proprietà invasive, supportate dalla loro spiccata capacità di degradare i componenti della matrice extracellulare. Questa capacità è mediata dalla via dell’attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi (u-PA) e dalla sua regolazione da parte degli inibitori dell’attivatore del plasminogeno (PAI-1 e PAI-2). Le cellule MV3 sono caratterizzate dall’espressione di marcatori associati alle metastasi, quali le integrine (ad es. VLA-2) e i recettori dei fattori di crescita, che sono collegati al loro fenotipo aggressivo.

Nei modelli di xenotrapianto, le cellule MV3 mostrano una rapida formazione di tumori e un’elevata frequenza di metastasi spontanee, in particolare ai polmoni. Queste caratteristiche sono state fondamentali nella ricerca preclinica volta a svelare i meccanismi alla base della disseminazione del melanoma e della resistenza alla terapia. I tumori MV3 nei topi nudi conservano le caratteristiche istologiche del tumore originale derivato dal paziente, tra cui un’elevata attività mitotica e una pigmentazione limitata. Le proprietà procoagulanti delle cellule MV3 contribuiscono ulteriormente al loro comportamento metastatico, poiché mostrano attività del fattore tissutale e sono in grado di attivare direttamente la protrombina in trombina, potenziando le interazioni con il microambiente tumorale.

La linea cellulare MV3 è stata impiegata anche in studi incentrati sul ruolo delle molecole di superficie cellulare e sulla loro regolazione nelle metastasi del melanoma. Ad esempio, la linea cellulare esprime livelli significativi di molecola di adesione intercellulare-1 (ICAM-1) e di recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR), che sono associati a un maggiore potenziale metastatico. Il modello continua a essere fondamentale per la valutazione delle terapie mirate e per la comprensione dei fattori molecolari alla base della malignità del melanoma.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma amelanotico
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
  • MV-3
  • MV 3

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
MV3 (codice catalogo Cytion 305495)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_W280

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
76 anni
Etnia
Non specificato