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A72
Tessuto
Muscolo
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
A 72, A-72

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A72

Cell line · Codice prodotto 602398

A72 cells are a canine fibrosarcoma cell line derived from a spontaneously occurring tumor in a dog. These cells are used primarily in veterinary oncology...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule A72 sono una linea cellulare di fibrosarcoma canino derivata da un tumore spontaneo di un cane. Queste cellule sono utilizzate principalmente nella ricerca oncologica veterinaria per studiare la biologia, il comportamento e le risposte ai trattamenti dei fibrosarcomi canini. La loro importanza si estende agli studi di oncologia comparativa, dove le conoscenze acquisite sui tumori canini possono essere applicate alla ricerca sui tumori umani grazie alle somiglianze biologiche tra alcuni tumori canini e umani.

La linea cellulare A72 presenta una morfologia aderente, simile a quella dei fibroblasti, ed è nota per la sua crescita aggressiva in vitro. È stata utilizzata per studiare vari aspetti della biologia delle cellule tumorali, tra cui la proliferazione, le metastasi e le interazioni delle cellule tumorali con la matrice extracellulare. Queste cellule sono particolarmente preziose per valutare l'efficacia degli agenti chemioterapici e per esplorare nuove strategie terapeutiche, tra cui l'immunoterapia e le terapie mirate.

Le cellule A72 rappresentano inoltre un modello utile per studiare le vie molecolari coinvolte nella crescita e nella progressione tumorale, come la segnalazione attraverso PI3K/Akt, MAPK e altre vie correlate. Sono fondamentali per la comprensione delle basi genetiche e molecolari del fibrosarcoma, che possono aiutare a identificare potenziali biomarcatori per la diagnosi e bersagli per il trattamento in oncologia veterinaria e umana.

Tessuto
Muscolo
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • A 72
  • A-72

02Classificazione

Organismo
Cane
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile a un fibroblasto
Tempo di raddoppio
24 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
A72 (numero di catalogo Cytion 602398)
Codice fiscale NCBI
9615
Cellosaurus
CVCL_3453

05Espressione e suscettibilità

Suscettibilità ai virus
Coronavirus canini, adenovirus canini I, II, virus dell'herpes canino, parainfluenzavirus canini, parvovirus canini, virus del cimurro canino, virus minuto dei canidi

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2 daranno origine a un monostrato confluente entro 3 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
Golden Retriever
Età dei donatori
8 anni