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D283Med
Tessuto
Cervello
Malattia
Medulloblastoma
Sinonimi
D283 Med, D283 MED, D283-MED, D283_Med, D-283 Med, D-283MED, D283MED, D283-Med, D-283, D283, Med 283, H283

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D283Med

Cell line · Codice prodotto 300330

The D283Med cell line is a human medulloblastoma cell line that was derived from the cerebellum of a 6-year-old male. Medulloblastoma is a type of primiti...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare D283Med è una linea cellulare di medulloblastoma umano derivata dal cervelletto di un maschio di 6 anni. Il medulloblastoma è un tipo di tumore neuroectodermico primitivo che colpisce principalmente i bambini e si localizza nel cervelletto, la parte del cervello responsabile del controllo motorio e della coordinazione. Le cellule D283Med sono ampiamente utilizzate nella ricerca oncologica, in particolare negli studi sulla biologia e la farmacologia dei medulloblastomi.

Questa linea cellulare presenta un modello di crescita aderente ed è stata ampiamente utilizzata per esplorare le vie molecolari coinvolte nella patogenesi del medulloblastoma, come le vie di segnalazione Sonic Hedgehog (SHH) e WNT, che notoriamente svolgono un ruolo significativo nello sviluppo e nella progressione di questi tumori. I ricercatori utilizzano la linea D283Med per valutare l'efficacia e la resistenza terapeutica, studiare i profili di espressione genica ed esplorare nuovi bersagli terapeutici. La crescita robusta della linea e le caratteristiche genetiche tipiche del medulloblastoma la rendono un modello prezioso per gli studi preclinici volti a comprendere la biologia del tumore e a testare farmaci antitumorali.

Inoltre, le cellule D283Med sono utilizzate in studi genetici per comprendere l'impatto delle mutazioni e valutare i meccanismi di metastasi e recidiva nel medulloblastoma. Esse costituiscono uno strumento cruciale per lo studio dei processi oncogenici a livello cellulare, contribuendo così in modo significativo allo sviluppo di terapie mirate per questo aggressivo tumore cerebrale pediatrico.

Tessuto
Cervello
Malattia
Medulloblastoma
Applicazioni
coltura cellulare 3D, Neuroscienze
Sinonimi
  • D283 Med
  • D283 MED
  • D283-MED
  • D283_Med
  • D-283 Med
  • D-283MED
  • D283MED
  • D283-Med
  • D-283
  • D283
  • Med 283
  • H283

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente e in sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tumorigenico
Sì, in topi nudi
Cariotipo
Il cariotipo è 45, xY, -7, -8, -17, -20, der(20)t(1,20)(q12,q13), 8q+, 17p+ (range = 41-46). Si tratta di una linea cellulare ipodiploide con una frequenza di ploidie superiori del 5,4%. Tre cromosomi marcatori sono presenti in tutte le cellule. Essi sono: der(20)t(1,20)(q12,q13), 8q+ e 17p+. N7, N17 e N20 hanno copie singole. La singola x è strutturalmente normale e il cromosoma Y è presente, come confermato dalla microscopia a fluorescenza.

04Identificatori

Riferimento bibliografico
D283Med (numero di catalogo Cytion 300330)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1155

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Glutammina sintetasi positiva, enolasi specifica del neurone positiva, proteine acide fibrillari gliali negative, proteina S100 (S-100) negativa
Isoenzimi
AK-1, 1, ES-D, 1, G6PD, B, GLO-I, 2, Me-2, 0, PGM1, 1, PGM3, 1

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Subcoltura
Raccogliere le cellule in sospensione in una provetta da 15 ml e sciacquare accuratamente le cellule aderenti con PBS senza calcio e magnesio (3-5 ml di PBS per T25, 5-10ml per le fiasche di coltura T75). Aggiungere Accutase (1-2ml per T25, 2,5ml per T75), coprendo completamente il foglio cellulare. Incubare a temperatura ambiente per 10 minuti, quindi centrifugare le cellule in sospensione e quelle aderenti. Risospendere accuratamente le cellule e distribuirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
6 anni
Etnia
Europeo