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Human Mesenchymal Stem Cells, Chorion Villi
Tessuto
Villi del corion

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Human Mesenchymal Stem Cells, Chorion Villi

Cell line · Codice prodotto 300646

Human Mesenchymal Stem Cells (MSCs) derived from chorion villi represent a highly versatile population of multipotent stromal cells capable of differentia...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule staminali mesenchimali umane (MSC) derivate dai villi coriali rappresentano una popolazione altamente versatile di cellule stromali multipotenti in grado di differenziarsi in molteplici linee cellulari, tra cui adipociti, osteoblasti e condrociti. Queste cellule vengono isolate dai villi coriali, una parte della placenta che svolge un ruolo fondamentale nello scambio materno-fetale. I villi coriali sono unici in quanto sono composti da tessuti sia fetali che materni, fornendo un microambiente distinto che contribuisce alle robuste capacità di auto-rinnovamento e differenziazione delle MSC derivate da questa fonte. Le MSC provenienti dai villi coriali mostrano un fenotipo più primitivo rispetto alle MSC derivate da tessuti adulti, spesso con un tasso di proliferazione più elevato e un potenziale di differenziazione più ampio. Queste caratteristiche le rendono particolarmente preziose per la ricerca nella medicina rigenerativa, nell'ingegneria tissutale e nella modellizzazione delle malattie.

È stato rigorosamente dimostrato in vitro che queste MSC si differenziano in adipociti, osteoblasti e condrociti quando coltivate in terreni di differenziazione specifici per il lignaggio, sottolineando il loro potenziale per applicazioni nella rigenerazione dei tessuti e nella modellizzazione delle malattie. L'origine unica di queste cellule dai villi coriali conferisce loro proprietà immunomodulanti specifiche, che possono differire dalle MSC derivate da altre fonti come il midollo osseo o il tessuto adiposo. Questa distinzione è fondamentale per gli studi incentrati sulle condizioni immunitarie o sullo sviluppo di terapie cellulari allogeniche.

Le MSC vengono crioconservate nei primi passaggi in un criomedio specializzato, garantendo la loro vitalità e funzionalità dopo lo scongelamento. Ogni crioviale contiene un minimo di 1 x 106 cellule con un tasso di vitalità compreso tra il 92% e il 95%, determinato dal test di esclusione con colorante blu di tripano. Queste cellule provengono da donatori sani che hanno fornito il loro consenso informato, garantendo pratiche di raccolta etiche. Ogni lotto viene sottoposto a rigorosi controlli di qualità, compresi test approfonditi per l'identificazione, la purezza, la potenza e la vitalità delle cellule. Queste misure garantiscono che le MSC coltivate siano di alta qualità e adatte ad applicazioni di ricerca, escludendo l'uso terapeutico o in vivo.

Tessuto
Villi del corion
Applicazioni
Test sui farmaci, medicina rigenerativa, ricerca sulle malattie

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Non specificato
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Morfologia fibroblastica a forma di fuso ben distribuita per almeno 5 passaggi. Meno del 2% delle cellule presenta una morfologia spontanea simile a quella dei miofibroblasti in ogni passaggio.
Tipo di cellula
Cellule staminali

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Cellule staminali mesenchimali umane, villi del corion (Cytion numero di catalogo 300646)
Codice fiscale NCBI
9606

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
Un pannello completo di marcatori, tra cui CD73/CD90/CD105 (positivo) e CD14/CD34/CD45/HLA-DR (negativo), viene utilizzato nell'analisi in citometria a flusso per identificare le MSC coltivate (P2-P3) prima della crioconservazione. Questi marcatori sono raccomandati dal comitato ISCT MSC.
Virus
Il donatore è negativo per HBV (PCR), Treponema pallidum (PCR) e HIV-1/2 (IFA). Le cellule sono negative per HBV, HCV, HSV1, HSV2, CMV, EBV, HHV6, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum.

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Alpha MEM, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w/o: Ribonucleosidi, w/o: Desossiribonucleosidi, w: 1,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2g/L NaHCO3
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 2 ng/mL bFGF
Reagente di dissociazione
Tripsina-EDTA
Subcoltura
Per la coltura di routine di cellule aderenti: Aspirare il vecchio terreno di coltura dalle cellule aderenti e lavarle con PBS per rimuovere il terreno residuo. Dopo aver aspirato il PBS, aggiungere il volume appropriato di soluzione di tripsina/EDTA in base alle dimensioni del recipiente di coltura (ad esempio, 1 ml per una fiasca T25, 3 ml per una fiasca T75) e incubare a temperatura ambiente o a 37°C fino al distacco delle cellule (5-10 minuti). Monitorare il distacco al microscopio e, se necessario, picchiettare delicatamente il contenitore per liberare le cellule. Una volta staccate, aggiungere terreno completo per inattivare la tripsina/EDTA, risospendere delicatamente le cellule e trasferire un'aliquota della sospensione cellulare in un nuovo recipiente di coltura contenente terreno fresco. Porre il recipiente in un incubatore a 37°C con il 5% diCO2 e cambiare il terreno ogni 2-3 giorni.
Densità di semina
Da 1 a 3 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Primo rinnovo del liquido dopo 24 ore, poi ogni 2 o 3 giorni.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 80% FBS + 10% terreno basale + 10% DMSO per mantenere la vitalità, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100) per una crioprotezione superiore, che previene la differenziazione indesiderata preservando la pluripotenza.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
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Etnia
Caucasico