KMS-12-PE

La linea cellulare KMS-12-PE, ottenuta dal versamento pleurico dello stesso paziente, differisce significativamente dalla KMS-12-BM per diversi aspetti. Le cellule KMS-12-PE rappresentano uno stadio di plasmacellula più terminalmente differenziato, come indicato dall'assenza di CD20 ma dalla continua espressione di CD38 e PCA-1. Una caratteristica sorprendente di KMS-12-PE è la sua capacità di produrre e secernere ectopicamente un'amilasi di tipo salivare, sia nel versamento pleurico del paziente che in coltura, il che la rende unica tra le linee cellulari di mieloma umano. Questo fenomeno è associato a una delezione cromosomica in prossimità della regione in cui si trova il gene dell'amilasi, nello specifico del(1)(p22→pter), osservata in una percentuale significativa di cellule KMS-12-PE.

Nonostante queste differenze, sia KMS-12-PE che KMS-12-BM condividono lo stesso marcatore clonale, la traslocazione t(11;14)(q13;q32), comune nei casi di mieloma. Tuttavia, le cellule KMS-12-PE mostrano meno anomalie cromosomiche rispetto a KMS-12-BM e tendono a essere ipodiploidi. Come KMS-12-BM, KMS-12-PE non produce immunoglobuline, né in superficie né in forma secretoria, anche se le cellule hanno un reticolo endoplasmatico ben sviluppato. La mancanza di tumorigenicità di entrambe le linee cellulari, nonostante la loro crescita aggressiva in vitro, e la loro proliferazione stabile a lungo termine in terreno privo di siero le rendono strumenti preziosi per lo studio della biologia del mieloma, in particolare nel contesto del mieloma non produttore di Ig.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia