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Vero E6
Tessuto
Rene normale

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Vero E6

Cell line · Codice prodotto 305008

Vero E6 cells, also known as Vero C1008 or Vero 76 clone E6, are a continuous line of epithelial cells derived from the kidney of the African green monkey...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule Vero E6, note anche come Vero C1008 o Vero 76 clone E6, sono una linea continua di cellule epiteliali derivate dal rene della scimmia verde africana, Chlorocebus sabaeus. Il clone Vero E6, una sotto-linea di cellule Vero, è particolarmente noto per la sua utilità nella ricerca virologica grazie alla sua elevata suscettibilità a un'ampia gamma di virus, tra cui i coronavirus come SARS-CoV e SARS-CoV-2, il virus Ebola e il virus Zika.

La linea cellulare è fondamentale per la produzione di vaccini, come quelli per l'encefalite giapponese, grazie alla sua capacità di coltura e isolamento del virus. Le cellule hanno svolto un ruolo fondamentale nello sviluppo dei farmaci COVID, compresa la sperimentazione dell'inibitore della polimerasi remdesivir. Grazie alla loro capacità di supportare la replicazione di una varietà di virus, le cellule Vero E6 facilitano lo screening dei composti e la valutazione dell'efficacia antivirale.

Il loro ruolo negli studi clinici si estende alla valutazione di farmaci antinfiammatori come il desametasone e allo studio di prodotti genici come la glicoproteina P (proteina pgp) codificata dal gene pgp. Le cellule Vero E6 mancano del gene dell'interferone-β, il che spiega in parte la loro elevata suscettibilità alle infezioni virali; questa carenza impedisce loro di montare un'efficace risposta antivirale innata.

In sintesi, le cellule Vero E6 sono una risorsa preziosa nel campo della virologia e della biomedicina, in quanto forniscono una piattaforma versatile per lo screening antivirale, lo studio della replicazione in Vero e un aiuto nella ricerca della comprensione delle sequenze retrovirali.

Tessuto
Rene normale

02Classificazione

Organismo
Scimmia verde africana
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tempo di raddoppio
22 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Vero E6 (catalogo Cytion numero 305008)
Codice fiscale NCBI
60711
Cellosaurus
CVCL_0574

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
Adulti