Pereiti prie turinio

Medija ir reagentai

40 produktai

Accutase Cell Detachment Solution - 100 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€75.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Accutase Cell Detachment Solution - 500 ml

Accutase Cell Detachment Solution with EDTA and Phenol Red – 100 ml Accutase is a ready-to-use, sterile-filtered cell detachment solution designed as a gentle alternative to trypsin/EDTA for dissociating adherent mammalian cells from standard tissue culture plasticware and adhesion-coated surfaces. It combines proteolytic and collagenolytic enzyme activity in a balanced salt solution to deliver effective yet controlled dissociation, preserving cell-surface proteins and supporting high post-passage viability and rapid reattachment. The Accutase formulation is based on Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) with EDTA and phenol red as a visual pH indicator. The enzymes are of non-mammalian and non-bacterial origin, making Accutase particularly well suited to stem cell research, vaccine workflows, and any application where animal- or microbially-derived contaminants must be minimised. The solution auto-inhibits at 37 °C, so no neutralising reagent or serum-containing medium is required after detachment – cells can be transferred directly into fresh medium. Key Features • Ready-to-use 1x sterile-filtered liquid – no dilution or reconstitution required • Combined proteolytic and collagenolytic enzyme activity for gentle dissociation • Each batch standardised to a defined dissociation activity for lot-to-lot consistency • Non-mammalian and non-bacterial enzyme origin • Auto-inhibits at 37 °C – no neutralising solution needed • Formulated in Dulbecco’s PBS with EDTA • Phenol red included as visual pH indicator • pH 6.8 – 7.8 Typical Applications Accutase gently dissociates a wide variety of adherent and sensitive cell types, including human embryonic stem cells (hESCs), human induced pluripotent stem cells (iPSCs), neural stem cells, primary neurons, and routinely cultured adherent lines such as HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 and A549. Typical use cases include: • Routine subculture and passaging of adherent mammalian cells • Gentle single-cell dissociation of hESCs, iPSCs and other sensitive lines • Sample preparation for flow cytometry and FACS analysis • Analysis of cell-surface markers where epitope integrity matters • Cell migration, proliferation and apoptosis assays • Quiescence assays by serum starvation and oncogene transfection studies • Tumor cell and neural crest cell migration assays • Production scale-up in bioreactor workflows For routine work, apply approximately 10 ml of Accutase per 75 cm2 of culture surface and incubate for 5–10 minutes at room temperature. The optimal incubation time should be determined for each cell line and should not exceed one hour. Prior to addition, rinse the cell layer with a Ca2+/Mg2+-free salt solution such as DPBS without calcium and magnesium to remove residual serum and divalent cations. Handling & Storage Store the unopened bottle frozen at -15 °C or below. Thaw either at room temperature or overnight at +2 °C to +8 °C. Do not thaw Accutase in a 37 °C water bath, as elevated temperatures reduce enzyme activity. After thawing, the solution can be stored for up to 2 months at +2 °C to +8 °C; do not store at room temperature. Do not pre-warm the reagent to 37 °C before application – add it directly to washed cells at room temperature. For long-term shelf life, single-use aliquoting is recommended to avoid repeated thaw cycles. Always work under aseptic conditions. Quality Manufactured under strict quality standards. Each batch of Accutase is sterile-filtered and tested for sterility, pH, appearance and dissociation activity to ensure consistent, reproducible performance from lot to lot. Product Specifications Specification Detail Product typeCell detachment / dissociation reagent FormatSterile-filtered liquid, ready-to-use Volume100 ml Working concentration1x (ready-to-use) Enzyme activityCombined proteolytic and collagenolytic Enzyme originNon-mammalian and non-bacterial Buffer systemDulbecco’s PBS with EDTA pH indicatorPhenol red pH range6.8 – 7.8 AppearanceClear, pale red to orange solution Storage temperature-15 °C or below Stability after thawingUp to 2 months at +2 °C to +8 °C Recommended use volume~10 ml per 75 cm2 culture surface Typical incubation time5 – 10 minutes at room temperature Shipping conditionsFrozen on dry ice Intended useFor research use and further manufacturing only Formulation (Composition per Liter) Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

€310.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Antibiotic/Antimycotic Solution (100x)

Volume: 100 ml Storage: ≤-15°C Sterility: Sterile-filtered Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) is a sterile, ready-to-use concentrate designed to reduce microbial contamination risks in cell culture and related laboratory applications. This 100x solution contains a well-established combination of penicillin, streptomycin, and amphotericin B—providing broad-spectrum antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, yeasts, and filamentous fungi. The formulation is suitable for use in eukaryotic cell cultures, bacterial media, and other contamination-sensitive systems, supporting clean and consistent lab operations. Application and Benefits Optimized for routine research protocols, this solution is widely used to maintain aseptic conditions in cell culture workflows. It offers reliable performance in contamination-sensitive environments, helping researchers reduce the risk of microbial overgrowth without compromising cell health or experimental reproducibility. The sterile-filtered formulation eliminates the need for additional solubilization steps, supporting streamlined media preparation and reducing variability in daily lab procedures. Usage and Compatibility To achieve standard working concentrations, dilute the solution 1:100 into your complete culture medium. The product is compatible with a broad range of mammalian cell lines and basal media. With consistent stock availability, researchers benefit from dependable supply continuity and simplified logistics planning. The solution should be stored at ≤ –15 °C and protected from repeated freeze-thaw cycles to maintain stability. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€45.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l gliukozės, w: 2,5 mM L-glutamino, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrio piruvato, w: 1,2 g/l NaHCO₃

DMEM:Ham's F12 yra plačiai pripažinta ir dažnai naudojama bazinė terpė ląstelių kultūroms biologiniams tyrimams. Ji tarnauja kaip pagrindinis maistinių medžiagų šaltinis įvairių žinduolių ląstelių linijų augimui, ypač kai papildoma veršelių serumu (FBS). Ši unikali formulė sujungia Dulbecco modifikuotą „Eagle“ terpę (DMEM) ir Ham's F-12 (Ham's maistinių medžiagų mišinį F-12) tiksliu 1:1 santykiu. L-glutamino pridėjimas dar labiau pagerina jos sudėtį. DMEM, kilusi iš „Eagle’s Minimal Essential Medium“ (EMEM), pasižymi didesne amino rūgščių ir vitaminų koncentracija, palyginti su savo pirmtake. Tuo tarpu „Ham’s F-12“ pagrįsta „Ham’s F-10“ terpe, suteikiančia papildomą būtinų komponentų rinkinį. Siekiant užtikrinti optimalų ląstelių augimą, įprasta DMEM:Ham's F-12 terpę papildyti FBS, kurio koncentracija paprastai yra 5–10 %. Šis priedas yra būtinas, nes terpėje trūksta augimo hormonų, lipidų ir baltymų, kurie yra labai svarbūs ląstelių vystymuisi. DMEM:Ham's F12 sudėtyje yra pH buferinė sistema, o dažnai į ją įdedama fenolio raudonojo, kuris yra pH indikatorius. Ląstelėms, auginamoms DMEM:Ham's F12 terpėje arba bet kurioje kitoje terpėje, kurioje naudojama bikarbonato buferinė sistema, būtina kontroliuojama 5–10 % CO₂ aplinka, kad būtų išlaikytas tinkamas pH lygis. Kokybės kontrolė • Steriliai filtruota Laikymas ir galiojimo laikas • Laikyti +2 °C – +8 °C temperatūroje, apsaugotą nuo šviesos. • Atidarius, laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6–8 savaites. Pristatymo sąlygos • Aplinkos temperatūra Laikymo sąlygos • Laikyti šaldytuve nuo +2 °C iki +8 °C tamsioje vietoje. Venkite užšalimo ir dažno šildymo iki +37 °C, nes tai sumažina produkto kokybę. • Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37 °C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pvz., mikrobangų krosnelių. • Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite jį iki kambario temperatūros. Sudėtis Kategorija Komponentai Koncentracija (mg/l) Amino rūgštys Glicinas 18,75 L-alaninas 4,45 L-argininas HCl 147,50 L-asparaginas H₂O 7,50 L-asparto rūgštis 6,65 L-cisteinas HCl H₂O 17,56 L-cistinas 2 HCl 31,29 L-glutamo rūgštis 7,35 L-glutaminas 365,00 L-histidino HCl H₂O 31,48 L-izoleucinas 54,47 L-leucinas 59,05 L-lizinas HCl 91,25 L-metioninas 17,24 L-fenilalaninas 35,48 L-prolinas 17,25 L-serinas 26,25 L-treoninas 53,45 L-triptofanas 9,02 L-tirozinas 2 Na 2 H₂O 55,79 L-valinas 52,85 Vitaminai D-biotinas 0,0035 Cholino chloridas 8,98 D-kalcio pantotenatas 2,24 Folio rūgštis 2,66 mio-inozitolis 12,60 Nikotinamidas 2,02 Piridoksino HCl 0,031 Piridoksalo HCl 2,00 Riboflavinas 0,219 Tiamino HCl 2,17 Vitaminas B12 0,68 Neorganinės druskos CaCl₂·2H₂O 154,50 CuSO₄·5H₂O 0,0013 Fe(NO₃)₃·9H₂O 0,05 FeSO₄ 7 H₂O 0,417 KCl 311,80 MgCl₂ 6 H₂O 61,20 MgSO₄ 7 H₂O 100,00 NaCl 6996,00 NaHCO₃ 1200,00 Na₂HPO₄ 71,02 NaH₂PO₄·2H₂O 70,87 ZnSO₄ 7 H₂O 0,432 Kiti komponentai D-gliukozė 3151,00 Hipoksantinas 2,40 HEPES 3574,50 Linolo rūgštis 0,042 Lipoinė rūgštis 0,105 Fenolio raudonojo natrio druska 8,63 Putrescinas 2 HCl 0,081 Natrio piruvatas 55,00 Timidinas 0,365

€25.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

DMEM, masė: 4,5 g/l gliukozės, masė: 4 mM L-glutamino, masė: 3,7 g/l NaHCO₃, masė: 1,0 mM natrio piruvato

DMEM (Dulbecco modifikuota Eagle terpė) yra labai universali ir plačiai naudojama bazinė terpė, skirta įvairių rūšių žinduolių ląstelių augimui biologiniuose tyrimuose palaikyti. Ji yra ideali terpė pirminių fibroblastų, neuronų, glijos ląstelių, HUVEC, lygiųjų raumenų ląstelių, taip pat tokių populiarių ląstelių linijų kaip „HeLa“, „293“, „Cos-7“ ir „PC-12“ kultivavimui. DMEM nuo kitų terpių išskiria jos unikali sudėtis. Palyginti su originaliąja „Eagle's Minimal Essential Medium“, joje yra net keturis kartus didesnė amino rūgščių ir vitaminų koncentracija. Iš pradžių sukurta su mažu gliukozės kiekiu (1 g/l) ir natrio piruvatu, DMEM dažnai naudojama su didesniu gliukozės kiekiu, tiek su natrio piruvatu, tiek be jo. Svarbu paminėti, kad DMEM sudėtyje nėra baltymų, lipidų ar augimo veiksnių, todėl ją būtina papildyti. Siekiant užtikrinti optimalų augimą, paprastai DMEM papildoma 10 % veršelių serumo (FBS). Be to, DMEM naudoja natrio bikarbonato buferinę sistemą, kuriai palaikyti fiziologinį pH reikalinga 5–10 % CO₂ aplinka. Dulbecco modifikuota „Eagle“ terpė (DMEM) yra labai vertinama tarp apibrėžtų ląstelių ir audinių kultūrų terpių, nes tenkina įvairių adhezyvinių ląstelių fenotipų augimo poreikius. Ji pranoksta originalią „Eagle“ terpę, sukurtą 1950-aisiais vištienos ląstelių kultivavimui, dėl patobulintos papildomos sudėties, žinomos kaip Dulbecco modifikacija. Ši modifikacija žymiai padidina pasirinktų amino rūgščių ir vitaminų kiekį iki keturių kartų, palyginti su originaliąja terpe. Ląstelių kultūros srityje DMEM atlieka svarbų vaidmenį kaip auginimo terpė įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir transformuotas ląsteles. Mokslininkai taip pat naudoja modifikuotą DMEM versiją įvairiems moksliniams tyrimams, pavyzdžiui, vaistų kūrimui, audinių inžinerijai ir ląstelių signalizacijos kelių tyrimams. Kokybės kontrolė • Steriliškai filtruota Laikymas ir galiojimo laikas • Laikyti +2 °C – +8 °C temperatūroje, apsaugotą nuo šviesos. • Atidarius pakuotę, laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6–8 savaites. Pristatymo sąlygos • Aplinkos temperatūra Laikymo sąlygos • Laikyti šaldytuve nuo +2 °C iki +8 °C tamsioje vietoje. Venkite užšalimo ir dažno šildymo iki +37 °C, nes tai sumažina produkto kokybę. • Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37 °C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pvz., mikrobangų krosnelių. • Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite jį iki kambario temperatūros. Sudėtis Kategorija Komponentai Koncentracija (mg/l) Amino rūgštys Glicinas 30,00 L-argininas HCl 84,00 L-cistinas 2 HCl 62,57 L-glutaminas 584,00 L-histidinas HCl H₂O 42,00 L-izoleucinas 105,00 L-leucinas 105,00 L-lizinas HCl 146,00 L-metioninas 30,00 L-fenilalaninas 66,00 L-serinas 42,00 L-treoninas 95,00 L-triptofanas 16,00 L-tirozinas 2 Na 2H₂O 103,79 L-valinas 94,00 Vitaminai Cholino chloridas 4,00 D-kalcio pantotenatas 4,00 Folio rūgštis 4,00 mio-inozitolis 7,20 Nikotinamidas 4,00 Piridoksalo HCl 4,00 Riboflavinas 0,40 Tiamino HCl 4,00 Neorganinės druskos CaCl₂·2 H₂O 265,00 Fe(NO₃)₃·9 H₂O 0,10 KCl 400,00 MgSO₄ 7H₂O 200,10 NaCl 6400,00 NaHCO₃ 3700,00 NaH₂PO₄·2H₂O 141,73 Kiti komponentai D-gliukozė 4500,00 Fenolio raudonojo natrio druska 15,90 Natrio piruvatas 110,00

€25.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

EMEM (MEM Eagle), sudėtyje: 2 mM L-glutamino, sudėtyje: 2,2 g/l NaHCO₃, sudėtyje: EBSS

„Eagle’s Minimum Essential Medium“ (EMEM) yra viena iš plačiausiai naudojamų bazinių terpių įvairių žinduolių ląstelių, ypač adhezyvinių ląstelių linijų, kultivavimui. Šią klasikinę formulę, kurią iš pradžių sukūrė Harry Eagle, sudaro esminės amino rūgštys, vitaminai ir neorganinės druskos, reikalingos pirminių ląstelių ir įsitvirtinusių ląstelių linijų augimui palaikyti standartinėmis kultivavimo sąlygomis. Ši paruošta naudoti, steriliai filtruota skysta formulė yra papildyta Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS), 2 mM L-glutaminu, D-gliukoze (1,0 g/l) ir 2,2 g/l natrio bikarbonatu (NaHCO₃), todėl ji tinka naudoti CO₂ kontroliuojamoje inkubatoriaus aplinkoje (paprastai 5 % CO₂). Į sudėtį įeitas fenolio raudonasis veikia kaip pH indikatorius, leidžiantis patogiai vizualiai stebėti terpės būklę ląstelių kultivavimo metu. Pagrindinės savybės • Klasikinė „Eagle’s MEM“ formulė su Earle’o subalansuotu druskų tirpalu (EBSS) • Sudėtyje yra 2 mM L-glutamino – paruošta nedelsiant naudoti • 2,2 g/l natrio bikarbonato – buferizuota 5 % CO₂ inkubacijai • Su D-gliukoze (1,0 g/l) kaip pagrindiniu anglies šaltiniu • Su fenolio raudonu kaip pH indikatoriumi • Be HEPES ir be natrio piruvato • Steriliai filtruota skysta terpė, paruošta naudoti • pH 7,0–7,6 Tipiniai taikymo atvejai EMEM tinka įvairių žinduolių ląstelių linijų, įskaitant HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 ir daugelio pirminių ląstelių, kultivavimui. Dažniausiai naudojama: • Adhezyvinių ląstelių linijų įprastinis palaikymas ir dauginimas • Virusų dauginimo ir vakcinų gamybos procesai • Citotoksiškumo ir biologinių tyrimų taikymo sritys • Transfekcijos ir baltymų ekspresijos tyrimai • Pagrindiniai ląstelių biologijos ir molekulinės biologijos tyrimai Siekiant užtikrinti optimalų ląstelių augimą, EMEM paprastai papildomas 5–10 % veršelių serumu (FBS) ir, priklausomai nuo ląstelių linijos, neesminėmis amino rūgštimis (NEAA) bei antibiotikais, pvz., penicilinu ir streptomicinu. Naudojimas ir laikymas Neatidarytą buteliuką laikykite +2 °C – +8 °C temperatūroje, apsaugotą nuo šviesos. Atidarius, naudokite aseptinėmis sąlygomis. L-glutaminas tirpale palaipsniui skaidosi – siekiant geriausių rezultatų, rekomenduojame terpę sunaudoti per 4 savaites nuo atidarymo arba, jei ji buvo laikoma ilgiau, prieš naudojimą papildyti šviežiu L-glutaminu. Prieš įpilant terpę į ląsteles, leiskite jai sušilti iki 37 °C. Kokybė Pagaminta laikantis griežtų kokybės standartų. Kiekviena partija tikrinama dėl sterilumo, pH, osmolalumo ir endotoksinų kiekio, siekiant užtikrinti pastovų veiksmingumą ląstelių kultūrų taikymuose. Produkto specifikacijos Specifikacija Išsami informacija Produkto tipasMEM Produkto kategorijaLąstelių kultūros terpės FormatasSkystas SterilusTaip Talpa500 ml L-glutaminasSu L-glutaminu (2 mM) GliukozėSu gliukoze (1,0 g/l) Natrio bikarbonatasSu NaHCO₃ (2,2 g/l) HEPESBe HEPES Natrio piruvatasBe natrio piruvato Fenolio raudonasisSu fenolio raudonuoju Druskos tirpalasEarle’o subalansuotas druskos tirpalas (EBSS) pH7,0 – 7,6 Endotoksinų kiekisNenurodyta Laikymasnuo +2 °C iki +8 °C Sudėtis (sudėtis viename litre)

€25.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Šaldymo terpė CM-1 – 100 ml

„Cytion“ „Freeze Medium CM-1“ – tai moderniausia kriokonservavimo terpė, sukurta siekiant užtikrinti aukščiausią ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo. Ši universali terpė tinka įvairiems ląstelių tipams, įskaitant tiek žmogaus, tiek gyvūnų ląsteles, todėl ji yra nepakeičiama priemonė įvairiems moksliniams tyrimams. „Freeze Medium CM-1“, kurio sudėtis yra kruopščiai subalansuotas krioprotektantų ir būtinų maistinių medžiagų derinys, sumažina ledo kristalų susidarymą ir ląstelių stresą užšaldymo proceso metu, taip išsaugodama ląstelių vientisumą. Pagrindinės „Freeze Medium CM-1“ savybės: • Platus suderinamumas: veiksminga įvairiems ląstelių tipams, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir įsitvirtinusias ląstelių linijas. • Aukštas gyvybingumas: optimizuota siekiant maksimaliai padidinti ląstelių atsigavimą ir gyvybingumą po atšildymo, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus. • Paruošta naudoti: patogiai paruošta ir sterilizuota, kad būtų galima iškart naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika. • Padidintas stabilumas: išlaiko pastovų veikimą standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrindamas atkartojamus rezultatus. • Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų. CM-1 naudojimas ląstelių užšaldymui Norėdami naudoti CM-1 adhezyvinių ir suspensinių ląstelių užšaldymui, atlikite šiuos veiksmus: • Adhezyvinių ląstelių atveju jas nuplaukite ir atskirkite nuo kultūros substrato. Suspensinių ląstelių atveju pereikite tiesiai prie kito žingsnio. • Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jų koncentracija yra tinkama. • Centrifuguokite ląsteles, kad jos nusėstų, tada vėl suspenduokite CM-1 užšaldymo terpėje. • Perkelkite resuspenduotas ląsteles į kriovialus. • Prieš perkeliant ląsteles į ilgalaikio saugojimo vietą, naudokite lėto užšaldymo metodą. Metodas Aprašymas Veiksmai ❄️ Rankinis užšaldymas Žingsnis po žingsnio metodas, apimantis laipsnišką temperatūros mažinimą, siekiant užtikrinti ląstelių gyvybingumą. 1️⃣ Ląsteles sušaldymo terpėje padėkite į 4 °C šaldiklį 40 minučių. 2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms. 3️⃣ Ląsteles laikykite skystame azote ilgalaikiam saugojimui. ❄️ Naudojant „Mr. Frosty“ Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos. 1️⃣ Paruoškite ląsteles kriovialėse su užšaldymo terpe. 2️⃣ Įdėkite krioviales į „Mr. Frosty“ indą. 3️⃣ Laikykite -80 °C temperatūroje 24 valandas, prieš perkeliant į skystą azotą. ❄️ Šaldiklis su reguliuojamu užšalimo greičiu „Thermo Fisher“ ar kitų gamintojų aukšto tikslumo šaldiklis, skirtas kontroliuoti temperatūros mažėjimą. 1️⃣ Nustatykite prietaisą taip, kad temperatūra palaipsniui mažėtų. 2️⃣ Įdėkite paruoštas ląsteles į šaldiklį. 3️⃣ Pasibaigus užšaldymo ciklui, perkelkite ląsteles į skystą azotą. • Ilgalaikiam saugojimui kriovialus laikykite temperatūroje, žemesnėje nei -130 °C, arba skystame azote. Sudėtis • Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų • Buferinis pajėgumas: pH = 7,2–7,6 „Cytion“ šaldymo terpė CM-1 yra patikimas krioprezervacijos sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiose mokslinių tyrimų srityse.

€99.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Šaldymo terpė CM-1 – 50 ml

„Cytion“ „Freeze Medium CM-1“ – tai moderniausia kriokonservavimo terpė, sukurta siekiant užtikrinti aukščiausią ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo. Ši universali terpė tinka įvairiems ląstelių tipams, įskaitant tiek žmogaus, tiek gyvūnų ląsteles, todėl ji yra nepakeičiama priemonė įvairiems moksliniams tyrimams. „Freeze Medium CM-1“, kurio sudėtis yra kruopščiai subalansuotas krioprotektantų ir būtinų maistinių medžiagų derinys, sumažina ledo kristalų susidarymą ir ląstelių stresą užšaldymo proceso metu, taip išsaugodama ląstelių vientisumą. Pagrindinės „Freeze Medium CM-1“ savybės: • Platus suderinamumas: veiksminga įvairiems ląstelių tipams, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir įsitvirtinusias ląstelių linijas. • Aukštas gyvybingumas: optimizuota siekiant maksimaliai padidinti ląstelių atsigavimą ir gyvybingumą po atšildymo, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus. • Paruošta naudoti: patogiai paruošta ir sterilizuota, kad būtų galima iškart naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika. • Padidintas stabilumas: išlaiko pastovų veikimą standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrindamas atkartojamus rezultatus. • Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų. CM-1 naudojimas ląstelių užšaldymui Norėdami naudoti CM-1 adhezyvinių ir suspensinių ląstelių užšaldymui, atlikite šiuos veiksmus: • Adhezyvinių ląstelių atveju jas nuplaukite ir atskirkite nuo kultūros substrato. Suspensinių ląstelių atveju pereikite tiesiai prie kito žingsnio. • Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jų koncentracija yra tinkama. • Centrifuguokite ląsteles, kad jos nusėstų į nuosėdas, tada vėl suspenduokite CM-1 užšaldymo terpėje. • Perkelkite resuspenduotas ląsteles į kriovialus. • Prieš perkeliant ląsteles į ilgalaikio saugojimo vietą, naudokite lėto užšaldymo metodą. Metodas Aprašymas Veiksmai ❄️ Rankinis užšaldymas Žingsnis po žingsnio metodas, apimantis laipsnišką temperatūros mažinimą, siekiant užtikrinti ląstelių gyvybingumą. 1️⃣ Ląsteles sušaldymo terpėje padėkite į 4 °C šaldiklį 40 minučių. 2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms. 3️⃣ Ląsteles laikykite skystame azote ilgalaikiam saugojimui. ❄️ Naudojant „Mr. Frosty“ Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos. 1️⃣ Paruoškite ląsteles kriovialėse su užšaldymo terpe. 2️⃣ Įdėkite krioviales į „Mr. Frosty“ indą. 3️⃣ Laikykite -80 °C temperatūroje 24 valandas, prieš perkeliant į skystą azotą. ❄️ Šaldiklis su reguliuojamu užšalimo greičiu „Thermo Fisher“ ar kitų gamintojų aukšto tikslumo šaldiklis, skirtas kontroliuoti temperatūros mažėjimą. 1️⃣ Nustatykite prietaisą taip, kad temperatūra palaipsniui mažėtų. 2️⃣ Įdėkite paruoštas ląsteles į šaldiklį. 3️⃣ Pasibaigus užšaldymo ciklui, perkelkite ląsteles į skystą azotą. • Ilgalaikiam saugojimui kriovialus laikykite temperatūroje, žemesnėje nei -130 °C, arba skystame azote. Sudėtis • Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų • Buferinis pajėgumas: pH = 7,2–7,6 „Cytion“ šaldymo terpė CM-1 yra patikimas krioprezervacijos sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiose mokslinių tyrimų srityse.

€59.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Ham's F12K Medium, w: 2.0 mM L-Glutamine, w: 2.0 mM Sodium pyruvate, w: 2.5 g/L NaHCO3

Introducing Ham's F-12K (Kaighn's) Medium, a specialized modification of Ham's F-12 medium designed to meet the unique requirements of biological research. This advanced medium offers distinct advantages, enhancing the cultivation of primary human hepatocytes, as well as rat and chicken liver cells, particularly in reduced serum conditions. Ham's F-12K (Kaighn's) Medium is carefully formulated to optimize cell culture conditions. It features an enriched composition, providing elevated levels of essential components such as amino acids and sodium pyruvate, as well as additional elements including putrescine, thymidine, hypoxanthine, and zinc. These additions enable researchers to supplement the medium with minimal serum or defined components for specific cell types, facilitating precise experimental conditions. Notably, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium does not contain proteins or growth factors. Consequently, supplementation with growth factors and Fetal Bovine Serum (FBS) is often necessary, allowing researchers to tailor the medium to the requirements of their specific cell lines. For optimal performance, the concentration of FBS must be carefully optimized for each cell line, ensuring optimal growth and functionality. To maintain physiological pH, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium employs a sodium bicarbonate buffer system (2.5 g/L), necessitating a controlled 5-10% CO2 environment during cultivation. This ensures the medium's pH remains within the ideal range for cell growth and viability. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing as well as warming up to +37°C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37°C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium but the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2H2O 135,24 Copper(II) sulfate x 5H2O 0,00 Iron (II) sulfate x 7H2O 0,83 Magnesium chloride x 6H2O 105,72 Magnesium sulfate x 7H2O 394,49 Potassium chloride 283,29 Potassium dihydrogen phosphate 58,52 Sodium chloride 7597,20 di-Sodium hydrogen phosphate anhydrous 115,02 Zinc sulfate x 7H2O 0,14 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 1260,00 Hypoxanthine 4,08 DL-α-Lipoic acid 0,21 Phenol red 3,00 Putrescine x 2HCl 0,32 Sodium pyruvate 220,00 NaHCO3 2500,00 Thymidine 0,73 Amino Acids L-Alanine 17,82 L-Arginine x HCl 421,40 L-Asparagine x H2O 30,02 L-Aspartic acid 26,62 L-Cysteine x HCl x H2O 70,24 L-Glutamine 292,20 L-Glutamic acid 29,42 Glycine 15,01 L-Histidine x HCl x H2O 41,92 L-Isoleucine 7,87 L-Leucine 26,24 L-Lysine x HCl 73,04 L-Methionine 8,95 L-Phenylalanine 9,91 L-Proline 69,06 L-Serine 21,02 L-Threonine 23,82 L-Tryptophan 4,08 L-Tyrosine 10,87 L-Valine 23,42 Vitamins D(+)-Biotin 0,07 D-Calcium pantothenate 0,48 Choline chloride 13,96 Folic acid 1,32 myo-Inositol 18,02 Nicotinamide 0,04 Pyridoxine x HCl 0,06 Riboflavin 0,04 Thiamine x HCl 0,34 Vitamin B12 1,36

€108.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Ham's F12 Medium, sudėtyje: 1,0 mM stabilaus glutamino, sudėtyje: 1,0 mM natrio piruvato, sudėtyje: 1,176 g/l NaHCO₃

„Ham’s F-12 Medium“, taip pat žinoma kaip „Ham’s F-12 Nutrient Mix“, yra plačiai naudojama bazinė terpė, sukurta specialiai ląstelių kultūroms. Ji plačiai taikoma serumo neturinčioms kinų žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląstelėms, plaučių ląstelėms ir pelių L ląstelėms auginti vienos ląstelės kultūrose. Be to, „Ham’s F-12“ yra pirmenybinė terpė kloninio toksiškumo tyrimui (CTA). Vienas iš jos pastebimų privalumų – gebėjimas palaikyti ląstelių augimą be serumo papildų. Tai pašalina galimą serumo komponentų sukeliamą trukdymą, užtikrinant nuoseklius ir patikimus eksperimentų rezultatus. Sudarydama be serumo auginimo aplinką, „Ham's F-12“ terpė suteikia tyrėjams didesnį tyrimų kontrolės lygį. Kita svarbi „Ham’s F-12“ terpės savybė – jos tinkamumas vienos ląstelės pasėjimui. Dėl to ji yra puikus pasirinkimas įvairioms ląstelių linijoms, įskaitant CHO ląsteles, plaučių ląsteles ir pelių L ląsteles. Optimizuota terpės maistinių medžiagų sudėtis palengvina atskirų ląstelių prisitvirtinimą ir augimą, leidžiant sukurti homogeniškas ląstelių kultūras su geresniu atkuriamumu. Be to, „Ham's F-12“ terpė yra pripažinta kaip pageidaujama terpė kloninio toksiškumo tyrimui (CTA). Šis tyrimas atlieka lemiamą vaidmenį vertinant medžiagų citotoksinį poveikį ląstelėms. Naudodami „Ham's F-12“ terpę CTA tyrime, mokslininkai gali tiksliai įvertinti įvairių junginių ar gydymo būdų poveikį atskiroms ląstelėms, taip gaudami vertingos informacijos apie toksikologinius profilius. Kokybės kontrolė • pH = 7,2 ± 0,02 esant 20–25 °C. • Kiekviena partija buvo ištirta dėl sterilumo ir mikoplazmų bei bakterijų nebuvimo. Laikymas • Laikyti šaldytuve +2–+8 °C temperatūroje, tamsioje vietoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C pablogina produkto kokybę. • Terpės negalima kaitinti aukštesnėje nei 37 °C temperatūroje arba naudoti nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelių). • Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, išimkite reikiamą kiekį iš butelio ir pašildykite jį kambario temperatūroje. • Visų terpių, išskyrus bazinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos. Sudėtis Komponentai mg/l Neorganinės druskos Kalcio chloridas x 2H₂O 44,00 Vario(II) sulfatas x 5H₂O 0,00 Geležies (II) sulfatas x 7H₂O 0,83 Magnio chloridas x 6H₂O 122,00 Kalio chloridas 223,65 Natrio chloridas 7599,00 bevandenis dinatrio vandenilio fosfatas 142,04 Cinko sulfatas x 7H₂O 0,86 Kiti komponentai D(+)-gliukozė bevandenė 1801,60 Hipoksantinas 4,08 Linolo rūgštis 0,08 DL-α-lipoinė rūgštis 0,21 Fenolio raudonasis 1,20 Putrescinas x 2HCl 0,16 Natrio piruvatas 110,00 Timidinas 0,73 NaHCO₃ 1176,00 Amino rūgštys L-alaninas 8,91 L-argininas x HCl 210,70 L-asparaginas x H₂O 15,01 L-asparto rūgštis 13,31 L-cisteinas x HCl x H₂O 35,12 L-alanil-L-glutaminas 217,30 L-glutamo rūgštis 14,71 Glicinas 7,51 L-histidinas x HCl x H₂O 20,96 L-izoleucinas 3,94 L-leucinas 13,12 L-lizinas x HCl 36,54 L-metioninas 4,48 L-fenilalaninas 4,96 L-prolinas 34,53 L-serinas 10,51 L-treoninas 11,91 L-triptofanas 2,04 L-tirozinas 5,44 L-valinas 11,71 Vitaminai D(+)-biotinas 0,01 D-kalcio pantotenatas 0,24 Cholino chloridas 13,96 Folio rūgštis 1,32 mio-inozitolis 18,02 Nikotinamidas 0,04 Piridoksinas x HCl 0,06 Riboflavinas 0,04 Tiaminas x HCl 0,34 Vitaminas B12 1,36

€25.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

HEPES Buffer Solution (1M)

Volume: 100 ml Storage: +2°C to +8°C Sterility: Sterile-filtered HEPES Buffer Solution (1 M), also known as N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, is a zwitterionic organic buffering agent widely used in cell culture media. It is designed to maintain stable pH conditions in the physiological range of 6.7 to 8.6, supporting optimal cellular function during in vitro applications. Application and Benefits HEPES provides reliable buffering capacity in cell culture systems, particularly when cells are handled outside a CO₂ incubator. The addition of 10–25 mM HEPES to culture media offers enhanced pH stability during extended manipulation periods, helping to maintain consistent experimental conditions. This buffer is membrane-impermeable, has minimal interference with biochemical reactions, and demonstrates strong chemical and enzymatic stability. These properties make it suitable for a wide range of cell culture and biochemical applications. Formulation and Usage The solution is supplied as a 1 M concentrate prepared in cell culture–grade water and is sterile-filtered for use in contamination-sensitive environments. It can be diluted to the desired working concentration depending on application requirements. Store at +2°C to +8°C and handle under aseptic conditions to preserve product integrity. For research use only. Not for use in diagnostic or therapeutic procedures. Not for use in humans or animals.

€52.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

IMDM, w: 4.5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 25 mM HEPES, w: 1.0 mM Sodium pyruvate, w: 3.024 g/L NaHCO3

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) is a complex and enriched growth medium for cell culture. IMDM is a modification of DMEM containing selenium and has additional amino acids, vitamins, and inorganic salts compared to DMEM. It lacks iron and requires supplementation with Fetal Bovine Serum (FBS). IMDM uses a sodium bicarbonate buffer system and requires a 5-10% CO2 environment to maintain physiological pH. IMDM is well suited for rapidly proliferating, high-density cell cultures, including Jurkat, COS-7, and macrophage cells. The various modifications of IMDM available for a range of cell culture applications can be found using the media selector tool. Liquid media provide essential nutrients for all cell culture applications. Each of our high-quality cell culture media is manufactured according to the initially published formula or modifications necessary to the consistent performance and stability of the culture medium. IMDM vs. DMEM IMDM contains potassium nitrate instead of ferric nitrate and HEPES and sodium pyruvate. The additional components in IMDM make it more suitable for specialized cell types and specific applications than DMEM. IMDM vs. RPMI IMDM and RPMI have different formulations that may be relevant for PMA/ionomycin stimulation. One significant difference is the concentration of Ca2+. While RPMI contains 0.42 mM Ca2+, IMDM contains 1.49 mM. Quality control • pH = 7.2 +/- 0.02 at 20-25°C. • Each lot has been tested for sterility and absence of mycoplasma and bacteria. Maintenance • Keep refrigerated at +2°C to +8°C in the dark. Freezing and warming up to +37° C minimize the quality of the product. • Do not heat the medium to more than 37° C or use uncontrollable sources of heat (e.g., microwave appliances). • If only a part of the medium is to be used, remove this amount from the bottle and warm it up at room temperature. • Shelf life for any medium except for the basic medium is 8 weeks from the date of manufacture. Composition Components mg/L Inorganic Salts Calcium chloride x 2 H2O 219,00 Potassium chloride 330,00 Potassium nitrate 0.076 Magnesium sulfate anhydrous 97,73 Sodium chloride 4,505.00 Sodium dihydrogen phosphate anhydrous 109,00 Sodium selenite 0,02 Other Components D(+)-Glucose anhydrous 4,500.00 HEPES 5,958.00 Sodium pyruvate 110,00 Phenol red 15,00 Amino Acids L-Alanine 25,00 L-Arginine x HCl 84,00 L-Asparagine x H2O 25,00 L-Aspartic acid 30,00 L-Cystine x 2HCl 91,24 L-Glutamine 584,00 L-Glutamic acid 75,00 Glycine 30,00 L-Histidine x HCl x H2O 42,00 L-Isoleucine 104,80 L-Leucine 104,80 L-Lysine x HCl 146,20 L-Methionine 30,00 L-Phenylalanine 66,00 L-Proline 40,00 L-Serine 42,00 L-Threonine 95,20 L-Tryptophan 16,00 L-Tyrosine x 2Na 104,20 L-Valine 93,60 Vitamins D(+)-Biotin 0.013 D-Calcium pantothenate 4,00 Choline chloride 4,00 Folic acid 4,00 myo-Inositol 7,20

€25.00

neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Ląstelių kultūros terpės: apžvalga

Gamtos mokslų srityje viena iš svarbiausių metodikų yra ląstelių kultūra. Terminas „ląstelių kultūra“ reiškia ląstelių, audinių ar organų paėmimą iš gyvūno ar augalo ir vėlesnį tų ląstelių, audinių ar organų implantavimą į dirbtinę aplinką, palankią jų išlikimui ir (arba) augimui. Pagrindiniai aplinkos reikalavimai, būtini optimaliam ląstelių vystymuisi, yra kontroliuojama temperatūra, substratas, prie kurio ląstelės gali prisitvirtinti, tinkama auginimo terpė ir inkubatorius, palaikantis optimalų pH ir osmolalumą. Kad ląstelės galėtų išaugti iki savo pilno potencialo, joms būtinos šios sąlygos.

Tinkamos auginimo terpės parinkimas in vitro kultivavimui yra ląstelių kultūros etapas, kuris yra ir svarbiausias, ir gyvybiškai būtinas. Augimo terpė, dar vadinama kultūrinė terpe, yra skystis arba gelis, sukurtas skatinti organizmų vystymąsi mikroskopiniu, ląstelių arba augalų lygiu. Ląstelių auginimui naudojama terpė dažnai turi pakankamą energijos kiekį ir medžiagų, reguliuojančių ląstelių ciklą. Pagrindiniai kultūrinės terpės komponentai yra amino rūgštys, vitaminai, neorganinės druskos, gliukozė ir serumas. Serumas į terpią įdedamas, nes jis veikia kaip augimo veiksnių, hormonų ir prisijungimo veiksnių šaltinis. Be maistinių medžiagų tiekimo, terpė taip pat padeda palaikyti pH ir osmolalumo lygį.

Ląstelių kultūroje naudojamų terpių rūšys

Tiek žmogaus, tiek gyvūnų ląstelės gali būti auginamos dirbtinėje arba sintetinėje terpėje, taip pat visiškai natūralioje terpėje, papildytoje natūraliais elementais. Toliau pateiksime apžvalgą apie įvairius šiuo metu prieinamus terpių tipus.

Natūralios terpės

Natūraliose terpėse gali būti tik natūralioje būsenoje esantys biologiniai skysčiai. Natūralios terpės yra labai naudingos ir patogios įvairių gyvūnų ląstelių tipų auginimui. Nepakankamas supratimas apie tikslius natūralių terpių komponentus yra pagrindinis veiksnys, lemiantis mažą rezultatų, gautų naudojant natūralias terpes, pakartojamumą.

Dirbtinės terpės

Dirbtinių arba sintetinių terpių paruošimas apima maistinių medžiagų (tiek organinių, tiek neorganinių), serumo baltymų, angliavandenių, kofaktorių, vitaminų ir druskų, taip pat O₂ ir CO₂ dujų fazių pridėjimą [1].

Siekiant užtikrinti vieną ar kelias iš šių funkcijų, buvo sukurti įvairių tipų dirbtiniai terpe: 1) Greitas išgyvenimas (subalansuotas druskų tirpalas su tiksliu pH ir osmosiniu slėgiu). 2) Ilgalaikis išgyvenimas (subalansuotas druskų tirpalas, papildytas įvairiais organinių cheminių medžiagų ir (arba) serumo mišiniais). 3) Neribotas vystymasis. 4) Specializuotos funkcijos.

Dirbtinės terpės skirstomos į keturias atskiras klases:

Terpės, kurių sudėtyje yra serumo

Dažniausiai gyvūnų ląstelių auginimui naudojamose terpėse randamas priedas yra veršelių serumas. Jis į kultūrinę terpę dedamas kaip nebrangus priedas, siekiant užtikrinti kuo geresnes augimo sąlygas. Be to, kad serumas veikia kaip nestabilių ar vandenyje netirpių maistinių medžiagų, hormonų ir augimo veiksnių, proteazės inhibitorių bei kitų medžiagų pernešėjas ar chelatorius, jis taip pat suriša ir neutralizuoja kenksmingas molekules.

Serumo neturinti terpė

Serumo buvimas terpėje turi nemažai trūkumų ir gali sukelti rimtų interpretavimo klaidų imunologiniuose tyrimuose [2, 3]. Buvo sukurta įvairių be serumo terpių [4, 5]. Paprastai šios terpės yra specialiai suformuluotos tam, kad palaikytų vieno ląstelių tipo kultūrą, pavyzdžiui, „Knockout Serum Replacement“ ir „Knockout DMEM“ iš „Thermo Fisher Scientific“ bei „mTESR“ terpė iš „Stem Cell Technologies“ [6], skirta kamieninėms ląstelėms [7].

Be to, į šias terpes įtraukiami nustatyti kiekiai išgrynintų augimo veiksnių, lipoproteinų ir kitų baltymų, kuriuos paprastai teikia serumas [8]. Šios terpes dažnai vadinamos „apibrėžtomis kultūrinėmis terpėmis“, nes jų sudedamosios dalys yra gerai žinomos.

Chemiškai apibrėžtos terpės

Šios terpės sudėtyje yra ypač grynų neorganinių ir organinių komponentų, kurie nėra užteršti jokiais teršalais. Jos taip pat gali būti papildytos grynais baltymais, pavyzdžiui, augimo faktoriais.

 Genetiškai modifikavus bakterijas ar mieles ir pridedant tam tikrų riebalų rūgščių, vitaminų, cholesterolio bei amino rūgščių, gaunami jų sudedamieji komponentai [9].

Baltyminių medžiagų neturinčios terpės

Baltyminių medžiagų neturinčios terpės yra tokios, kuriose visiškai nėra baltymų, o yra tik nebaltyminiai elementai. Palyginti su terpėmis, į kurias pridėta serumo, baltyminių medžiagų neturinčių terpių naudojimas skatina didesnį ląstelių dauginimąsi ir baltymų ekspresiją bei palengvina bet kurio tolesniame procese susidariusio produkto gryninimą [10–12]. Baltymai neįeina į tokias formules kaip MEM ir RPMI-1640. Tačiau prireikus gali būti įdedamas baltymų papildas.

Kultūrinės terpės ir jų pagrindiniai komponentai

Komercinę kultūrinę terpę galima įsigyti miltelių arba skysčio pavidalu; dažnai joje yra įvairių maistinių medžiagų, pavyzdžiui, amino rūgščių, gliukozės, druskų, vitaminų ir kitų maisto papildų. 

Kiekvienai ląstelių linijai šių komponentų poreikis skiriasi, o būtent šie skirtumai lemia didelę terpės sudėčių įvairovę. Kiekvienas komponentas atlieka tam tikrą funkciją, kuri bus aprašyta tolesniuose skyriuose:

Buferinės sistemos

Siekiant išlaikyti optimalias auginimo sąlygas, būtina kontroliuoti pH, o tai dažniausiai daroma naudojant vieną iš dviejų buferinių sistemų:

Natūrali buferinė sistema

CO₂/H₂CO₃ santykis atmosferoje yra toks pat kaip ir terpėje, todėl susidaro natūralus buferinis mechanizmas. Siekiant išsaugoti šį natūralų buferinį mechanizmą, kultūros turi būti laikomos aplinkoje, kurioje CO₂ koncentracija sudaro 5–10 %; tai dažniausiai pasiekiama naudojant CO₂ inkubatorių. Vienas iš didžiausių natūralaus buferio privalumų – jo pigumas ir saugumas.

HEPES

Cheminis buferavimas naudojant zwitterjoną HEPES pasižymi didesniu buferavimo pajėgumu pH intervale 7,2–7,4 ir nereikalauja reguliuojamos dujinės aplinkos. Tam tikrų tipų ląstelėms didesnė HEPES dozė gali būti žalinga. Terpės, kurių sudėtyje yra HEPES, taip pat yra daug jautresnės fluorescencinės šviesos fototoksiniam poveikiui [13].

Fenolio raudonasis

pH indikatorius fenolio raudonasis dažnai įtraukiamas į komerciškai parduodamas kultūrinės terpės, leidžiant nuolat stebėti pH. Ląstelėms dauginantis, jų gaminami metabolitai sukelia pH pokytį ir dėl to pasikeičia terpės spalva. Fenolio raudonasis turi dvejopą poveikį terpės spalvai: rūgščiame pH ji tampa geltona, o šarminiame pH – violetinė. Esant pH 7,4 – optimaliam ląstelių kultūrai – terpė tampa fluorescuojančiai raudona.

Tačiau fenolio raudonasis turi keletą trūkumų: pirma, fenolio raudonasis gali imituoti daugelio steroidinių hormonų, visų pirma estrogeno, veikimą [14]. Todėl tiriant estrogenui jautrias ląsteles, pavyzdžiui, krūties audinį, rekomenduojama naudoti terpę be fenolio raudonojo. Natrio ir kalio pusiausvyra sutrinka dėl fenolio raudonojo buvimo kai kuriose be serumo sudėtyse. Šio poveikio galima išvengti į terpę įdedant serumo arba galvijų hipofizės hormono [15]. Trečia, fenolio raudonojo buvimas trukdo aptikti ląsteles atliekant srauto citometrijos eksperimentus.

Neorganinės druskos

Terpės, kurių sudėtyje yra neorganinių druskų, pvz., natrio, kalio ir kalcio jonų, padeda išlaikyti osmosinę pusiausvyrą ir reguliuoja membranos potencialą.

Amino rūgštys

Kadangi aminorūgštys yra pagrindiniai baltymų komponentai, jos yra būtina kiekvienos kada nors sukurto ląstelių auginimo terpės sudėtinė dalis. Kadangi ląstelės pačios negali pagaminti tam tikrų aminorūgščių, svarbu, kad kultūrinėje terpėje būtų būtinųjų aminorūgščių. Jos yra būtinos ląstelių proliferacijai, o jų koncentracija lemia didžiausią pasiekiamą ląstelių tankį. Ypač svarbi yra būtinoji amino rūgštis – L-glutaminas.

L-glutaminas veikia kaip antrinis energijos šaltinis medžiagų apykaitai ir tiekia azotą NAD, NADPH bei nukleotidų sintezei. Kadangi L-glutaminas yra nestabili amino rūgštis, kuri laikui bėgant virsta forma, kurios ląstelės negali panaudoti, ją būtina papildomai įtraukti į terpę.

Be to, į auginimo terpę galima įtraukti nepagrindinių amino rūgščių, siekiant papildyti tas, kurios buvo sunaudotos augimo proceso metu. Ląstelių augimas paspartėja, o jų gyvybingumas padidėja, kai auginimo terpė papildoma nepagrindinėmis amino rūgštimis.

Angliavandeniai

Angliavandeniai cukrų pavidalu yra pagrindinis energijos šaltinis. Daugelyje terpių, be labiau paplitusių gliukozės ir galaktozės, taip pat yra maltozės ir fruktozės.

Baltymai ir peptidai

Albuminas, transferinas ir fibronektinas yra dažniausiai naudojami baltymai ir peptidai. Jie ypač svarbūs terpėse, kurių sudėtyje nėra serumo. Albuminas, transferinas, aprotininas, fetuinas ir fibronektinas yra tik keletas baltymų, kurių galima rasti serume – turtingame baltymų šaltinyje.

Albuminas yra pagrindinis kraujyje randamas baltymas, kurio funkcija – jungti ir transportuoti įvairias medžiagas, įskaitant vandenį, druskas, laisvąsias riebalų rūgštis, hormonus ir vitaminus, tarp skirtingų organų ir ląstelių. Albumino gebėjimas jungtis prie cheminių medžiagų daro jį veiksmingu kandidatu pašalinti kenksmingus junginius iš terpės, kurioje auginamos ląstelės.

Aprotininas yra apsauginė medžiaga ląstelių kultūrų sistemose, nes jis yra stabilus esant neutraliam ir rūgštiniam pH, taip pat atsparus aukštai temperatūrai ir proteolitinių fermentų sukeliamam irimui. Jis gali slopinti daugelį serino proteazių, tarp jų – tripsiną.

Fetuinas yra glikoproteinas, kurio kiekis gyvūnų vaisiaus ir naujagimio serume gali būti didesnis nei suaugusiųjų serume. Be to, jis veikia kaip serino proteazės inhibitorius. Baltymas fibronektinas yra esminis komponentas ląstelių adhezijos procese. Transferinas yra baltymas, kuris transportuoja geležį ir yra atsakingas už jos pristatymą į ląstelių membranas.

Riebalų rūgštys ir lipidai

Jos atlieka lemiamą vaidmenį beserumėje terpėje, kai nėra serumo.

Vitaminai

Ląstelių vystymuisi ir dauginimuisi reikalingi įvairūs vitaminai. Ląstelės negali pačios pagaminti pakankamo vitaminų kiekio, todėl audinių kultūroje jie yra būtini kaip maisto papildai.

Ląstelių kultūroje serumas yra pagrindinis vitaminų šaltinis; tačiau terpės taip pat praturtinamos įvairiais vitaminais, kad tiktų konkrečiam ląstelių tipui. Dažniausiai augimui skatinti naudojami B grupės vitaminai.

Mikroelementai

Cheminiai elementai, tokie kaip varis, cinkas, selenas ir trikarboksirūgšties tarpinių junginių, vadinami mikroelementais. Mikroelementai dažnai pridedami į terpes, kurių sudėtyje nėra serumo, siekiant pakeisti tuos, kurie paprastai yra serume. Šie elementai yra svarbūs cheminiai komponentai, reikalingi sveikam ląstelių vystymuisi. Daugelis biocheminių reakcijų, pavyzdžiui, fermentų aktyvumas, priklauso nuo tam tikrų mikroelementų.

Terpės priedai

Tam tikroms ląstelių linijoms rekomenduojamoms pilnoms auginimo terpėms reikalingi papildomi komponentai, kurių nėra bazinėse terpėse ir serume. Šie maisto papildai palaiko ląstelių augimą ir tinkamą medžiagų apykaitą.

Nors hormonai, augimo faktoriai ir signalinės molekulės yra būtini tam tikrų ląstelių linijų tinkamai proliferacijai, visada reikėtų laikytis šių atsargumo priemonių: kadangi priedų įdėjimas gali pakeisti visos auginimo terpės osmolalumą, o tai gali slopinti ląstelių vystymąsi, visada patartina patikrinti osmolalumą po priedų įdėjimo. Daugumai ląstelių linijų optimalus osmolalumas svyruoja nuo 260 iki 320 mOSM/kg.

Antibiotikai

Antibiotikai dažnai naudojami bakterinių ir grybelinių teršalų plitimui slopinti [16], nors jie nėra būtini ląstelių augimui. Kadangi antibiotikai gali paslėpti mikoplazmų ir atsparių bakterijų sukeltą užteršimą, jų reguliarus naudojimas ląstelių kultūrose nerekomenduojamas [17, 18].

Be to, antibiotikai gali sutrikdyti jautrių ląstelių medžiagų apykaitą. Dažnai naudojami „MilliporeSigma“ ir „Life Technologies“ gaminami penicilino ir streptomicino deriniai. „Plasmocin“ buvo naudojamas gliomos ląstelių linijų TS603, TS516 ir BT260 kultūrose [19], ir buvo įrodyta, kad jis veiksmingai pašalina mikoplazmų užteršimą (20).

Serumas

Serume yra albuminų, augimo veiksnių ir augimo inhibitorių. Serumas yra viena iš svarbiausių ląstelių kultūros terpės sudedamųjų dalių, nes jis aprūpina amino rūgštimis, baltymais, vitaminais (ypač riebaluose tirpiais vitaminais, tokiais kaip A, D, E ir K), angliavandeniais, lipidais, hormonais, augimo veiksniais, mineralais ir mikroelementais.

Kultivuojamų ląstelių vystymuisi skatinti dažnai naudojamas veršelių ir galvijų vaisiaus serumas. Vaisiaus serumas yra gausus augimo veiksnių šaltinis ir tinka ląstelių klonavimui bei jautrių ląstelių vystymuisi. Dėl sumažėjusių augimą skatinančių savybių veršelių serumas naudojamas kontaktinio slopinimo eksperimentuose. Įprastose auginimo terpėse dažnai yra nuo 2 % iki 10 % serumo. Serumo įmaišymas į kultūrinę terpę atlieka šias funkcijas [21]:

  • Serumas tiekia ląstelėms būtinas maistines medžiagas (tiek tirpale, tiek prisijungusias prie baltymų).

  • Serume yra keletas augimo veiksnių ir hormonų, dalyvaujančių augimo skatinime ir specializuotoje ląstelių veikloje.

  • Jame yra daug rišamųjų baltymų, pavyzdžiui, albumino ir transferino, kurie perneša kitas chemines medžiagas į ląstelę. Pavyzdžiui, albuminas į ląsteles perneša riebalus, vitaminus, hormonus ir pan.

  • Jis taip pat suteikia baltymų, pavyzdžiui, fibronektino, kurie padidina ląstelių adheziją prie substrato. Be to, jis gamina plitimo elementus, kurie padeda ląstelėms išsiplėsti prieš dalijimąsi.

  • Jis tiekia proteazės inhibitorius, kurie užkerta kelią proteolizei ląstelėse.

  • Jame taip pat yra mineralų, pvz., Na+, K+, Zn2+ ir Fe2+.

  • Jis padidina terpės klampumą, taip apsaugodamas ląsteles nuo mechaninių pažeidimų maišant suspensijos kultūrą.

  • Be to, jis veikia kaip buferis.

Nuorodos

[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Gyvūnų ląstelių mityba audinių kultūroje; pradiniai tyrimai su sintetinėmis terpėmis. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8

[2] Kerbel R, Blakeslee D. Greita veršelių vaisiaus serumo komponento adsorbcija kultūroje auginamose žinduolių ląstelėse. Galimas artefaktų šaltinis atliekant tyrimus su antiserumais, nukreiptais prieš ląstelių specifinius antigenus. Immunology. 1976;31:881-91

[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Serumo įmaišymas į terpę, naudojamą ląstelių suspensijoms paruošti, kaip galimas artefaktų šaltinis ląstelių tarpininkaujamose reakcijose, tiriamose naudojant poplitealinio limfmazgio testą. J Immunogenet. 1980;7:483–9

[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercinės serumo neturinčios terpės: hibridomų auginimas ir monokloninių antikūnų gamyba. J Immunol Methods. 1991;145:175–83

[5] Barnes D, Sato G. Kultivuojamų ląstelių auginimo be serumo terpėje metodai. Anal Biochem. 1980;102:255-70

[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O ir kt. HSP70 chaperonai perkelia RNR neturintį TDP-43 į anizotropinius intranuklearinius skystus sferinius apvalkalus. „Science“. 2021;371:

[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J ir kt. Dauno sindromo sukeltas senėjimas sutrikdo nervinių progenitorinių ląstelių branduolio struktūrą. „Cell Stem Cell“. 2022;29:116–130.e7

[8] Iscove N, Melchers F. Visiškas serumo pakeitimas albuminu, transferinu ir sojos riebalais lipopolisacharidams reaguojančių B limfocitų kultūrose. „J Exp Med“. 1978;147:923–33

[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Chemiškai apibrėžtos baltymų neturinčios terpės, skirtos hibridomų auginimui ir monokloninių antikūnų gamybai, sistemingas tobulinimas. „J Biotechnol“. 1996;45:111–23

[10] Darfler F. Baltymių neturinti terpė hibridomų ir kitų imuninės sistemos ląstelių auginimui. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769–78

[11] Barnes D, Sato G. Serumo neturinti ląstelių kultūra: vieningas požiūris. „Cell“. 1980;22:649–55

[12] Hamilton W, Ham R. Kinų žiurkių ląstelių linijų kloninis augimas baltymų neturinčiose terpėse. In Vitro. 1977;13:537–47

[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Šviesai veikiamos HEPES turinčios kultūros terpės citotoksinio poveikio analizė. „In Vitro Cell Dev Biol“. 1985;21:282–7

[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolio raudonasis audinių kultūros terpėse yra silpnas estrogenas: pasekmės, susijusios su estrogenui jautrių ląstelių tyrimais kultūroje. „Proc Natl Acad Sci U S A“. 1986;83:2496–500

[15] Karmiol S. Serumo neturinčių terpių kūrimas. Į: Master JRW, red. „Animal Cell culture“, 3-iasis leidimas. Oksfordas: Oxford University Press; 2000.

[16] Perlman D. Antibiotikų naudojimas ląstelių kultūros terpėse. Methods Enzymol. 1979;58:110-6

[17] McGarrity G. Ląstelių kultūrų mikoplazminės infekcijos plitimas ir kontrolė. In Vitro. 1976;12:643–8

[18] Masters J, Stacey G. Terpės keitimas ir ląstelių linijų perauginimas. „Nat Protoc“. 2007;2:2276–84

[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M ir kt. Histonų demetilazė KDM6A tiesiogiai reaguoja į deguonį, reguliuodama chromatino būklę ir ląstelių likimą. „Science“. 2019;363:1217–1222

[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M ir kt. „Plasmocin™“ veiksmingumas įvairiose molikutų užkrėstose žinduolių ląstelių linijose, palyginti su ląstelių kultūrose dažniausiai naudojamais antibiotikais: vietinė patirtis. „Cytotechnology“. 2011;63:609–20

[21] Kragh Hansen U. Ligando prisijungimo prie serumo albumino molekuliniai aspektai. „Pharmacol Rev.“ 1981;33:17–53