Pereiti prie turinio
HROG33 T0 M1
Audinys
Smegenys
Liga
Glioblastoma

Dokumentai

HROG33 T0 M1

Cell line · Prekės numeris 300878

HROG33 T0 M1 is a primary human glioblastoma multiforme (GBM) cell line established from freshly resected tumor tissue of an adult female patient with WHO...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Mažos atsargos
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
1

01Bendra informacija

Aprašymas

HROG33 T0 M1 yra pirminė žmogaus glioblastoma multiforme (GBM) ląstelių linija, sukurta iš šviežiai pašalinto naviko audinio, paimto iš suaugusios moters, sergančios IV laipsnio glioblastoma, esančia kairėje pakaušio-smilkinio srityje. Pavadinimas „T0“ reiškia pirminį naviką pirminės diagnozės metu, o „M1“ reiškia atitinkamą in vitro modelį, gautą iš šio mėginio. Ląstelių linija buvo sukurta kaip sistemingų pastangų dalis sukurti itin mažo praėjimo GBM kultūras iš šviežio ir gyvybiškai kriokonservuoto naviko medžiagos, siekiant išsaugoti pacientui būdingas molekulinės ir funkcinės savybes.

HROG33 T0 M1 pasižymi adheziniu augimu su fibroblastams būdinga morfologija, tipine pirminėms GBM kultūroms. Ląstelės sudaro monosluoksnį ir in vitro pasižymi nuosekliu proliferacijos pajėgumu. Lyginamojoje tyrimo studijoje porinės kultūros, gautos iš šviežio ir kriokonservuoto naviko audinio, neparodė reikšmingų skirtumų morfologijoje, augimo kinetikoje ar reakcijoje į vaistus. Imunofenotipinis reprezentatyvių HROG ląstelių linijų charakterizavimas parodė nervų linijos žymeklių, įskaitant glial fibrillary acidic protein (GFAP), nestin ir vimentin, ekspresiją, atitinkančią gliomos fenotipą. HROG serijoje atliktos molekulinės analizės apėmė MGMT promotoriaus metilinimo, EGFR amplifikacijos ir TP53, IDH1/2, KRAS bei BRAF mutacijų būklės vertinimą, patvirtinantį navikams būdingų genominių savybių išsaugojimą sukurtose kultūrose.

Funkciniu požiūriu HROG kilmės ląstelių linijos buvo įvertintos pagal jautrumą standartiniams ir tiriamiesiems vaistams, naudojamiems GBM terapijoje, įskaitant temozolomidą, BCNU (karmustiną), vinkristiną ir imatinibą. Atitinkamų ląstelių linijų porų vaistų atsako profiliai parodė stabilų ir atkartojamą farmakologinį elgesį po audinių kriokonservavimo. Kaip itin mažo praėjimo pirminis GBM modelis, HROG33 T0 M1 suteikia klinikinę reikšmę turinčią in vitro sistemą glioblastomos biologijos, terapinio atsako prognozavimo ir pacientui būdingos naviko heterogeniškumo tyrimams, tuo pačiu sumažindamas artefaktus, susijusius su ilgalaikiu nuolatiniu ląstelių linijos prisitaikymu.

Audinys
Smegenys
Liga
Glioblastoma

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
Biologinio saugumo lygis
1

03Identifikatoriai

Nuoroda
HROG33 T0 M1 (Cytion katalogo numeris 300878)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_4U48

04Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l gliukozės, w: 2,5 mM L-glutamino, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrio piruvato, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820400a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame 50 % bazinę terpę + 40 % FBS + 10 % DMSO arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

06Donoras

Donoro amžius
46 metai
Etninė priklausomybė
Kaukaziečių