HROG33 T0 M1

HROG33 T0 M1 to pierwotna ludzka linia komórkowa glejaka wielopostaciowego (GBM) utworzona ze świeżo wyciętej tkanki nowotworowej dorosłej pacjentki z glejakiem stopnia IV według klasyfikacji WHO, zlokalizowanym w lewej okolicy potyliczno-skroniowej. Oznaczenie „T0” odnosi się do pierwotnego guza w momencie wstępnej diagnozy, a „M1” oznacza odpowiedni model in vitro pochodzący z tej próbki. Linia komórkowa została wyhodowana w ramach systematycznych działań mających na celu stworzenie kultur GBM o bardzo niskiej liczbie pasażów, zarówno ze świeżego, jak i kriokonserwowanego materiału nowotworowego, w celu zachowania specyficznych dla pacjenta cech molekularnych i funkcjonalnych.

HROG33 T0 M1 wykazuje przylegający wzrost o morfologii podobnej do fibroblastów, typowej dla pierwotnych kultur GBM. Komórki tworzą monowarstwę i wykazują stałą zdolność proliferacyjną in vitro. W porównawczym badaniu ustalenia, sparowane kultury pochodzące ze świeżej i kriokonserwowanej tkanki nowotworowej nie wykazały znaczących różnic w morfologii, kinetyce wzrostu ani reaktywności na leki. Charakterystyka immunofenotypowa reprezentatywnych linii komórkowych HROG wykazała ekspresję markerów związanych z linią komórkową układu nerwowego, w tym kwasowego białka włóknistego gleju (GFAP), nestiny i wimentyny, zgodną z fenotypem pochodzącym z glejaka. Analizy molekularne przeprowadzone w serii HROG obejmowały ocenę metylacji promotora MGMT, amplifikacji EGFR oraz statusu mutacyjnego TP53, IDH1/2, KRAS i BRAF, potwierdzając zachowanie cech genomowych charakterystycznych dla nowotworu w ustanowionych hodowlach.

Pod względem funkcjonalnym linie komórkowe pochodzące z HROG zostały ocenione pod kątem wrażliwości na standardowe i badane środki stosowane w terapii GBM, w tym temozolomid, BCNU (karmustyna), winkrystyna i imatynib. Profile odpowiedzi na leki dopasowanych par linii komórkowych wykazały stabilne i powtarzalne zachowanie farmakologiczne po kriokonserwacji tkanki. Jako model pierwotnego GBM o bardzo niskiej liczbie pasażów, HROG33 T0 M1 stanowi klinicznie istotny system in vitro do badania biologii glejaka wielopostaciowego, przewidywania odpowiedzi terapeutycznej i heterogeniczności nowotworów u poszczególnych pacjentów, minimalizując jednocześnie artefakty związane z długotrwałą ciągłą adaptacją linii komórkowych.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym