İçeriğe atla
HROG33 T0 M1
Doku
Beyin
Hastalık
Glioblastoma

HROG33 T0 M1

Cell line · Ürün numarası 300878

HROG33 T0 M1 is a primary human glioblastoma multiforme (GBM) cell line established from freshly resected tumor tissue of an adult female patient with WHO...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stok az
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama

HROG33 T0 M1, sol oksipitotemporal bölgede WHO derece IV glioblastoma bulunan yetişkin bir kadın hastanın taze rezeke edilmiş tümör dokusundan oluşturulan birincil insan glioblastoma multiforme (GBM) hücre hattıdır. "T0" tanımı, ilk tanıdaki birincil tümörü ifade ederken, "M1" bu numuneden türetilen karşılık gelen in vitro modeli belirtir. Hücre hattı, hastaya özgü moleküler ve fonksiyonel özellikleri korumak amacıyla, hem taze hem de hayati olarak kriyoprezervasyonlu tümör materyalinden ultra düşük pasajlı GBM kültürleri oluşturmak için sistematik bir çabanın parçası olarak üretilmiştir.

HROG33 T0 M1, primer GBM kültürlerine özgü fibroblast benzeri morfoloji ile yapışkan büyüme sergiler. Hücreler tek tabaka oluşturur ve in vitro olarak tutarlı proliferatif kapasite gösterir. Karşılaştırmalı kurulum çalışmasında, taze ve kriyoprezervasyonlu tümör dokusundan elde edilen eşleştirilmiş kültürler, morfoloji, büyüme kinetiği veya ilaç duyarlılığı açısından önemli bir fark göstermedi. Temsili HROG hücre hatlarının immünofenotipik karakterizasyonu, glioma kaynaklı fenotip ile tutarlı olarak glial fibriler asidik protein (GFAP), nestin ve vimentin dahil olmak üzere nöral soy ile ilişkili belirteçlerin ekspresyonunu gösterdi. HROG serisi üzerinde gerçekleştirilen moleküler analizler, MGMT promotör metilasyonu, EGFR amplifikasyonu ve TP53, IDH1/2, KRAS ve BRAF'ın mutasyonel durumunun değerlendirilmesini içermekte olup, kurulan kültürlerde tümöre özgü genomik özelliklerin korunmasını desteklemektedir.

İşlevsel olarak, HROG kaynaklı hücre hatları, temozolomid, BCNU (karmustin), vinkristin ve imatinib dahil olmak üzere GBM tedavisinde kullanılan standart bakım ve araştırma ajanlarına duyarlılık açısından değerlendirilmiştir. Eşleşen hücre hattı çiftlerinin ilaç yanıt profilleri, doku kriyoprezervasyonunun ardından stabil ve tekrarlanabilir farmakolojik davranış göstermiştir. Ultra düşük pasajlı birincil GBM modeli olan HROG33 T0 M1, glioblastoma biyolojisini, terapötik yanıt tahminini ve hastaya özgü tümör heterojenitesini araştırmak için klinik olarak ilgili bir in vitro sistem sağlarken, uzun süreli sürekli hücre hattı adaptasyonuyla ilişkili artefaktları en aza indirir.

Doku
Beyin
Hastalık
Glioblastoma

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
HROG33 T0 M1 (Cytion katalog numarası 300878)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_4U48

04İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L Glukoz, w: 2.5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM Sodyum piruvat, w: 1.2 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820400a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, iyileşmeyi artırmak ve kriyo kaynaklı stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren %50 bazal ortam + %40 FBS + %10 DMSO veya CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

06Bağışçı

Bağışçının yaşı
46 yıl
Etnik köken
Kafkas