Pāriet uz saturu
MCF10A
Audums
Krūts dziedzeris, krūts
Sinonīmi
MCF-10A, MCF 10A, MCF.10A, MCF10A, MCF10-A, MCF10a, MCF-10 Attached, Michigan Cancer Foundation-10A

Dokumenti

MCF10A

Cell line · Preces numurs 305026

The MCF10A human mammary epithelial cell line, established from the mammary gland of a 36-year-old female with fibrocystic disease, serves as a model for ...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

MCF10A cilvēka krūts epitēlija šūnu līnija, kas izveidota no 36 gadus vecas sievietes ar fibrocistisku slimību piena dziedzera, kalpo kā modelis, lai pētītu normālas krūts šūnu funkcijas, transformācijas un invazīvās krūts karcinomas pāreju no epitēlija uz mezenhīmu.

MCF10A šūnas ir epitēlija šūnu līnija, kas nav tumoroģēna, bet iegūta no labdabīgi proliferējošiem krūts audiem, tāpēc MCF10A šūnas ir noderīgas krūts šūnu pētījumos, sniedzot ieskatu krūts audzēja progresijā un audzēja šūnu dinamikā mammosfērās. MCF10 A šūnas, kam raksturīga trīsdimensiju augšana kolagēnā un spēja veidot acināru struktūras jauktā Matrigelā, ir uzticams modelis onkogēnu ietekmes analīzei un mammosfēras veidošanās izpētei, kas ir būtiska, lai izprastu piena dziedzeru progenitoršūnu īpašības un to lomu vēža pētījumos.

MCF10A šūnu līnija, lai gan tai piemīt bazālajam fenotipam līdzīgs fenotips, ekspresē lūmena un cilmes tipa marķieru kombināciju, kā arī epitēlija šūnu marķierus, piemēram, citokeratīnus un piena olbaltumvielas. To reakcija uz insulīnu, glikokortikoīdiem, holēras enterotoksīnu un epidermas augšanas faktoru (EGF) uzsver augšanas faktoru un hormonu nozīmi cilvēka krūts audu šūnu proliferācijā un izdzīvošanā.

MCF 10A modelis ļauj ieskatīties genomu signālu ceļos, kas regulē šūnu uzvedību un fenotipu 3D kultūrā, piedāvājot platformu imūnhistoķīmijas un imunofluorescences krāsošanai, lai vizualizētu šūnu procesus.
Šīs šūnas ir ļoti svarīgas, lai pētītu krūts šūnu pāreju krūts vēža attīstības laikā, tostarp lipīdu oksidācijas produktu genotoksicitātes lomu un uztura komponentu, piemēram, sojas tripsīna inhibitora, ietekmi uz šūnu funkcijām. Turklāt MCF 10A šūnu līnijas salīdzinājums ar citām līnijām, piemēram, MCF7 (kas ir tumorogēna un estrogēnu receptoru pozitīva) un MCF10F (cita netumorigēna līnija, bet ar atšķirīgām īpašībām), bagātina krūts vēža pētījumus, nodrošinot daudzveidīgus modeļus, lai izprastu neinvazīvu līdz ļoti metastātisku fenotipu spektru.

Audums
Krūts dziedzeris, krūts
Sinonīmi
  • MCF-10A
  • MCF 10A
  • MCF.10A
  • MCF10A
  • MCF10-A
  • MCF10a
  • MCF-10 Attached
  • Michigan Cancer Foundation-10A

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija
Tumorogēns
Nē

04Identifikatori

Atsauce
MCF10A (Cytion kataloga numurs 305026)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0598

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 5% zirgu seruma, 20 ng/ml EGF, 0,5 mikrogramus/ml hidrokortizona, 10 mikrogramus/ml insulīna. Vajadzības gadījumā pievienot 100 ng/ml holēras toksīna.
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
36 gadi