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Células Caki-2
Tecido
Rim
Doença
Carcinoma papilar
Sinónimos
CAKI-2, CaKi-2, caki-2, CAKI 2, Caki 2, Caki2, CAKI2

Documentos

Células Caki-2

Cell line · Número do produto 300140

A Caki-2 é uma linha celular de carcinoma renal de células claras (ccRCC) humano que apresenta morfologia epitelial e adere em condições de cultura in vitro. Esta...

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01Informações gerais

Descrição

Caki-2 é uma linha celular de carcinoma de células renais de células claras (ccRCC) humano que exibe morfologia epitelial e adere em condições de cultura in vitro. Constitui um modelo pré-clínico essencial para a investigação dos mecanismos do cancro renal e das respostas terapêuticas. A linha Caki-2 é particularmente notável pela sua resistência a determinados agentes quimioterapêuticos; apresenta uma sensibilidade reduzida ao 5-fluorouracil e ao inibidor multi-quinase sorafenib, que tem como alvo os VEGFRs 1-3, PDGFR-b e Raf-1, em comparação com a linha celular Caki-1. Esta sensibilidade diferencial é importante para o estudo dos mecanismos de resistência aos medicamentos e para a avaliação de novas estratégias terapêuticas no carcinoma de células renais.

O contexto genético das células Caki-2 inclui uma mutação de perda de função na proteína supressora de tumor von Hippel-Lindau (VHL), uma caraterística de muitos ccRCCs que leva à desregulação dos factores indutores de hipóxia (HIFs) e contribui para a tumorigénese. A capacidade das células Caki-2 para formar tumores em ratinhos imunocomprometidos torna-as uma ferramenta valiosa para estudos in vivo do crescimento do cancro e das metástases, fornecendo informações sobre o ambiente tumoral e potenciais intervenções terapêuticas. A sua utilização estende-se à exploração do papel da VHL na progressão do cancro e ao teste da eficácia de medicamentos que visam a via HIF e outras cascatas de sinalização associadas numa configuração experimental controlada.

Tecido
Rim
Doença
Carcinoma papilar
Sinónimos
  • CAKI-2
  • CaKi-2
  • caki-2
  • CAKI 2
  • Caki 2
  • Caki2
  • CAKI2

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial. As caraterísticas ultra-estruturais incluem microvilosidades e microfilamentos. Poucas mitocôndrias, lisossomas ou gotículas lipídicas. Corpos multilamelares frequentes. Ausência de partículas de vírus.
Tumorigénico
Sim, em ratinhos nus. Forma um carcinoma de células claras
Cariótipo
(P8) hipopentaplóide a hipohexaplóide (+A2, +A3, +B, +C, +D, +F, +G, -A) com anomalias incluindo dicêntricos, fragmentos acrocêntricos, minutos, quebras e grandes marcadores subtelocêntricos

04Identificadores

Referência
Caki-2 (número de catálogo Cytion 300140)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0235

05Expressão e suscetibilidade

Isoenzimas
Me-2, 1, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, G6PD, B, Produto de frequência fenotípica: 0.0511

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm² resultará numa monocamada 90% confluente em cerca de 4 dias.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
69 anos
Etnia
Caucasiano