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Cellule Caki-2
Tessuto
Rene
Malattia
Carcinoma papillare
Sinonimi
CAKI-2, CaKi-2, caki-2, CAKI 2, Caki 2, Caki2, CAKI2

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Cellule Caki-2

Cell line · Codice prodotto 300140

Caki-2 è una linea cellulare derivata dal carcinoma renale a cellule chiare (ccRCC) umano che presenta una morfologia epiteliale e aderisce in condizioni di coltura in vitro. Essa...

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01Informazioni generali

Descrizione

Il Caki-2 è una linea cellulare umana di carcinoma renale a cellule chiare (ccRCC) che presenta una morfologia epiteliale e aderisce in condizioni di coltura in vitro. È un modello preclinico essenziale per lo studio dei meccanismi del carcinoma renale e delle risposte terapeutiche. La linea Caki-2 si distingue in particolare per la sua resistenza ad alcuni agenti chemioterapici; mostra una minore sensibilità al 5-fluorouracile e all'inibitore multichinasico sorafenib, che ha come bersaglio i VEGFR 1-3, il PDGFR-b e il Raf-1, rispetto alla linea cellulare Caki-1. Questa sensibilità differenziale è significativa per studiare i meccanismi di resistenza ai farmaci e valutare nuove strategie terapeutiche nel carcinoma a cellule renali.

Il background genetico delle cellule Caki-2 comprende una mutazione con perdita di funzione nella proteina soppressore tumorale von Hippel-Lindau (VHL), un segno distintivo di molti ccRCC che porta alla deregolazione dei fattori inducibili dall'ipossia (HIF) e contribuisce alla tumorigenesi. La capacità delle cellule Caki-2 di formare tumori in topi immunocompromessi le rende uno strumento prezioso per gli studi in vivo della crescita e della metastasi del cancro, fornendo approfondimenti sull'ambiente tumorale e sui potenziali interventi terapeutici. Il loro uso si estende all'esplorazione del ruolo di VHL nella progressione del cancro e alla verifica dell'efficacia di farmaci che mirano alla via HIF e ad altre cascate di segnalazione associate in una configurazione sperimentale controllata.

Tessuto
Rene
Malattia
Carcinoma papillare
Sinonimi
  • CAKI-2
  • CaKi-2
  • caki-2
  • CAKI 2
  • Caki 2
  • Caki2
  • CAKI2

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio. Le caratteristiche ultrastrutturali includono microvilli e microfilamenti. Pochi mitocondri, lisosomi o goccioline lipidiche. Frequenti corpi multilamellari. Assenza di particelle virali.
Tumorigenico
Sì, in topi nudi. Forma un carcinoma a cellule chiare
Cariotipo
(P8) da ipopentaploide a ipoesaploide (+A2, +A3, +B, +C, +D, +F, +G, -A) con anomalie che includono dicentrici, frammenti acrocentrici, minuti, rotture e grandi marcatori subtelocentrici

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Caki-2 (numero di catalogo Cytion 300140)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0235

05Espressione e suscettibilità

Isoenzimi
Me-2, 1, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, G6PD, B, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0511

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2 darà luogo a un monostrato confluente al 90% in circa 4 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
69 anni
Etnia
Caucasico