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Células LCLC-103H
Tecido
Pulmão
Doença
Carcinoma de células grandes
Local da metástase
Derrame pleural
Sinónimos
LCLC103H, Large Cell Lung Cancer-103H

Documentos

Células LCLC-103H

Cell line · Número do produto 300169

A linha celular LCLC-103H é derivada de um carcinoma pulmonar de células grandes (LCLC), especificamente isolada a partir do derrame pleural de um doente adulto do sexo masculino com...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular LCLC-103H é derivada de um carcinoma pulmonar de grandes células (LCLC), especificamente estabelecido a partir do derrame pleural de um doente adulto do sexo masculino com um diagnóstico de carcinoma pulmonar de grandes células com células gigantes. O doente tinha sido previamente submetido a quimioterapia e radioterapia. Esta linha celular é particularmente notável pela sua expressão parcial de marcadores neuroendócrinos, que estão tipicamente associados ao cancro do pulmão de pequenas células (SCLC) e a certos tumores neuroendócrinos. Em particular, o antigénio detectado pelo anticorpo monoclonal RNL-1 mostra uma expressão de superfície focal nas células LCLC-103H, semelhante à observada em alguns carcinomas neuroendócrinos. No entanto, a expressão não é uniforme em todas as células, indicando heterogeneidade na população celular.

O LCLC-103H foi descrito na literatura como PAS (Periodic Acid-Schiff) negativo, distinguindo-o de outros subtipos de cancro do pulmão. Apresenta também uma notável formação de estroma, que é uma caraterística significativa do seu perfil histopatológico. Além disso, esta linha celular é conhecida por sobre-expressar o proto-oncogene MYC, que desempenha um papel crítico na proliferação celular e na tumorigénese. Estudos imunocitoquímicos demonstraram que a LCLC-103H não apresenta o espetro completo de diferenciação neuroendócrina observado no CPPC, uma vez que não apresenta reatividade com outros marcadores neuroendócrinos, como os identificados pelos anticorpos RNL-2 e RNL-3. Esta distinção é crucial para diferenciar o LCLC do SCLC, que é mais agressivo e apresenta normalmente uma maior sensibilidade a determinados agentes quimioterapêuticos. O perfil de expressão único do LCLC-103H torna-o um modelo valioso para o estudo das caraterísticas moleculares e imunológicas do carcinoma pulmonar de grandes células e da sua sobreposição com caraterísticas neuroendócrinas.

Tecido
Pulmão
Doença
Carcinoma de células grandes
Local da metástase
Derrame pleural
Sinónimos
  • LCLC103H
  • Large Cell Lung Cancer-103H

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Pleomorfo
Estado de ploidia
Aneuploide
Tempo de duplicação
26 horas

04Identificadores

Referência
LCLC-103H (número de catálogo Cytion 300169)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1375

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
0,5 a 1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
As células recuperam da congelação em 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
61 anos
Etnia
Caucasiano