İçeriğe atla
NRK-Pom121-EGFP3
Doku
Böbrek
Eş anlamlılar
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Ürün numarası 500669

NRK-Pom121-EGFP3 hücre hattı, normal sıçan böbrek (NRK) hücrelerinden türetilmiştir ve Pom121-EGFP3 füzyon proteinini eksprese edecek şekilde genetik olarak modifiye edilmiştir. Pom...

€800.00vergi ve kargo hariç
Sipariş üzerine üretilir
1

01Genel bilgiler

Açıklama

NRK-Pom121-EGFP3 hücre hattı normal sıçan böbrek (NRK) hücrelerinden türetilmiştir ve Pom121-EGFP3 füzyon proteinini ifade etmek üzere genetik olarak tasarlanmıştır. Pom121, nükleer gözenek kompleksinin (NPC) ayrılmaz bir bileşeni olan, nükleer zarf montajında ve NPC işlevinde önemli bir rol oynayan bir transmembran nükleoporindir. Geliştirilmiş yeşil floresan protein (EGFP3) etiketinin dahil edilmesi, floresan mikroskobu aracılığıyla canlı hücrelerdeki Pom121 dinamiklerinin, lokalizasyonunun ve etkileşimlerinin görselleştirilmesini ve incelenmesini kolaylaştırır. Bu da NRK-Pom121-EGFP3 hücre hattını nükleer taşıma mekanizmalarını ve NPC mimarisini araştırmak için değerli bir araç haline getirmektedir.

NRK-Pom121-EGFP3'ün ebeveyn hattı olan NRK hücreleri, kararlı büyüme özellikleri ve epitelyal morfolojileri nedeniyle çeşitli araştırma uygulamalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Pom121-EGFP3'ü ifade etmek için yapılan modifikasyon, araştırmacılara nükleositoplazmik taşınmanın altında yatan moleküler mekanizmaları, NPC'nin yapısal organizasyonunu ve hücre bölünmesi ve farklılaşması sırasında düzenlenmesini incelemek için sağlam bir model sağlar. Ayrıca bu hücre hattı, çeşitli genetik ve farmakolojik pertürbasyonların NPC işlevi üzerindeki etkilerini incelemek için kullanılabilir ve kanser ve nörodejeneratif bozukluklar gibi nükleer taşıma kusurlarıyla ilişkili hastalıklara dair içgörüler sunar.

Genel olarak, NRK-Pom121-EGFP3 hücre hattı, hücre biyolojisi ve moleküler araştırmalarda sofistike bir aracı temsil etmekte ve nükleositoplazmik etkileşimleri yöneten dinamik süreçler hakkında yüksek çözünürlüklü bilgiler sağlamaktadır. NPC bileşenlerinin canlı bir hücresel bağlamda gerçek zamanlı gözlemlenmesine izin verme yeteneği, hücresel taşıma mekanizmaları ve bunların sağlık ve hastalık üzerindeki etkileri hakkındaki anlayışımızı ilerletmek için onu paha biçilmez kılmaktadır.

Doku
Böbrek
Eş anlamlılar
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Sınıflandırma

Canlı
Sıçan
Büyüme özellikleri
Bağlı
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Fusiform şekilli fibroblast benzeri hücreler

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion katalog numarası 500669)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Eksprese edilen reseptörler
Epidermal büyüme faktörü (EGF), çoğalmayı uyarıcı aktivite (MSA)
Protein ekspresyonu
Pom121-EGFP3: Konum/Gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Ürünler
Epidermal büyüme faktörü (EGF), çoğalmayı uyarıcı aktivite (MSA), POM121, Transmembran, Nükleoporin, CMV Promotor, Neomisin, Fosfotransferaz

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS, 0,5 mg/mL G418 ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Eski ortamı atın ve hücreleri PBS ile yıkayın. Taze hazırlanmış %0,025 tripsin/%0,02 EDTA çözeltisini 37 santigrat dereceye ısıtarak ekleyin ve hücreler ayrılana kadar bekleyin; bu süre genellikle yaklaşık 5 dakika sürer. Taze besiyeri ekleyerek tripsini nötralize edin, ardından hücre karışımını bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin. Santrifüjden sonra süpernatantı çıkarın, hücre peletini taze kültür ortamında yeniden süspanse edin ve süspansiyonu yeni şişelere aktarın. 0,5 mg/ml nihai konsantrasyon elde etmek için kültür ortamına G418 ekleyin
Ekim yoğunluğu
2 ila 4 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
OsborneMendel