Skip to content
NRK-Pom121-EGFP3
Tissue
כליה
Synonyms
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Documents

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Product number 500669

The NRK-Pom121-EGFP3 cell line is derived from normal rat kidney (NRK) cells and is genetically engineered to express the Pom121-EGFP3 fusion protein. Pom...

US$800.00excl. tax and shipping
Made to order
1

01General information

Description

קו התאים NRK-Pom121-EGFP3 נגזר מתאי כליה רגילים של חולדה (NRK) והונדס גנטית כדי לבטא את חלבון היתוך Pom121-EGFP3. Pom121 הוא נוקליופורין טרנסממברני המהווה מרכיב אינטגרלי במתחם הנקבוביות הגרעיניות (NPC) וממלא תפקיד מכריע בהרכבת מעטפת הגרעין ובתפקוד ה-NPC. הכללת התגית של החלבון הירוק הזוהר המשופר (EGFP3) מקלה על הדמיה וחקירה של הדינמיקה, הלוקליזציה והאינטראקציות של Pom121 בתאים חיים באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. זה הופך את קו התאים NRK-Pom121-EGFP3 לכלי חשוב לחקר מנגנוני הובלה גרעיניים וארכיטקטורת NPC.

תאי NRK, הקו ההורי של NRK-Pom121-EGFP3, משמשים בדרך כלל ביישומים מחקריים שונים בשל מאפייני הצמיחה היציבים שלהם ומורפולוגיית האפיתל. השינוי לביטוי Pom121-EGFP3 מספק לחוקרים מודל יציב לבחינת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הובלה גרעינית-ציטופלזמית, הארגון המבני של ה-NPC והוויסות שלו במהלך חלוקת התאים וההתמיינות. בנוסף, קו תאים זה יכול לשמש לחקר ההשפעות של הפרעות גנטיות ופרמקולוגיות שונות על תפקוד ה-NPC, ומספק תובנות לגבי מחלות הקשורות לפגמים בהובלה גרעינית, כגון סרטן והפרעות נוירודגנרטיביות.

בסך הכל, קו התאים NRK-Pom121-EGFP3 מהווה כלי מתוחכם בביולוגיה תאית ובמחקר מולקולרי, המספק תובנות ברזולוציה גבוהה על התהליכים הדינמיים השולטים באינטראקציות גרעיניות-ציטופלזמיות. היכולת שלו לאפשר תצפית בזמן אמת על רכיבי ה-NPC בהקשר תאי חי הופכת אותו לבעל ערך רב לקידום ההבנה שלנו של מנגנוני הובלה תאיים והשלכותיהם על בריאות ומחלות.

Tissue
כליה
Synonyms
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Classification

Organism
Rat
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי פיברובלסטים בעלי צורה פוספורמית

04Identifiers

Citation
NRK-Pom121-EGFP3 (מספר קטלוגי Cytion 500669)
NCBI TaxID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), פעילות מגרה שכפול (MSA)
Protein expression
Pom121-EGFP3: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Products
פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), פעילות מגרה שכפול (MSA), POM121, טרנסממברנה, נוקליופורין, CMV Promotor, ניאומיצין, פוספטוטראנספראז

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתמיסה 10% FBS, 0.5 מ"ג/מ"ל G418
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
יש להשליך את המדיום הישן ולשטוף את התאים ב-PBS. יש להוסיף תמיסת טריפסין 0.025%/EDTA 0.02% שהוכנה זה עתה, מחוממת ל-37 מעלות צלזיוס, ולהמתין עד שהתאים יתנתקו, מה שלרוב אורך כ-5 דקות. נטרל את הטריפסין על ידי הוספת מדיום טרי, ואז העבר את תערובת התאים לצינור וצנטריפוגה. לאחר הצנטריפוגה, הסר את הנוזל העליון, השעה מחדש את משקע התאים במדיום תרבית טרי, והעבר את התרחיף לבקבוקים חדשים. שלב G418 במדיום התרבית כדי להשיג ריכוז סופי של 0.5 מ"ג/מ"ל
Seeding density
2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Breed / subspecies
אוסבורן מנדל