Перейти до вмісту
NRK-Pom121-EGFP3
Тканина
Нирка
Синоніми
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Документи

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Номер товару 500669

Клітинна лінія NRK-Pom121-EGFP3 походить від клітин нормальної нирки щура (NRK) і генетично модифікована для експресії фузійного білка Pom121-EGFP3. Pom...

€800.00без урахування податків та вартості доставки
Виготовляється на замовлення
1

01Загальна інформація

Опис

Клітинна лінія NRK-Pom121-EGFP3 отримана з клітин нормальної нирки щура (NRK) і генетично сконструйована для експресії злитого білка Pom121-EGFP3. Pom121 - це трансмембранний нуклеопорін, який є невід'ємним компонентом комплексу ядерних пор (NPC), що відіграє вирішальну роль у формуванні ядерної оболонки та функціонуванні NPC. Включення мітки розширеного зеленого флуоресцентного білка (EGFP3) полегшує візуалізацію та вивчення динаміки, локалізації та взаємодії Pom121 в живих клітинах за допомогою флуоресцентної мікроскопії. Це робить клітинну лінію NRK-Pom121-EGFP3 цінним інструментом для дослідження механізмів ядерного транспорту та архітектури NPC.

Клітини NRK, батьківська лінія NRK-Pom121-EGFP3, широко використовуються в різних дослідницьких програмах завдяки своїм стабільним характеристикам росту та епітеліальній морфології. Модифікація для експресії Pom121-EGFP3 надає дослідникам надійну модель для вивчення молекулярних механізмів, що лежать в основі нуклеоцитоплазматичного транспорту, структурної організації NPC та її регуляції під час поділу та диференціації клітин. Крім того, ця клітинна лінія може бути використана для вивчення впливу різних генетичних і фармакологічних збурень на функцію NPC, пропонуючи розуміння захворювань, пов'язаних з дефектами ядерного транспорту, таких як рак і нейродегенеративні розлади.

Загалом, клітинні лінії NRK-Pom121-EGFP3 є складним інструментом у клітинній біології та молекулярних дослідженнях, що дозволяє з високою роздільною здатністю вивчати динамічні процеси, які керують нуклеоцитоплазматичними взаємодіями. Здатність спостерігати за компонентами NPC в реальному часі в живому клітинному контексті робить його безцінним для поглиблення нашого розуміння механізмів клітинного транспорту та їхнього впливу на здоров'я і хвороби.

Тканина
Нирка
Синоніми
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Класифікація

Організм
Щур
Характеристики росту
Прихильник
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Фібробластоподібні клітини веретеноподібної форми

04Ідентифікатори

Посилання
NRK-Pom121-EGFP3 (номер за каталогом Cytion 500669)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
10116
Целозавр
CVCL_AV96
Вкладник
Лабораторія Елленберга (EMBL)

05Експресія та сприйнятливість

Рецептори, що експресуються
Епідермальний фактор росту (EGF), активність, що стимулює розмноження (MSA)
Експресія білків
Pom121-EGFP3: Розташування/ген: 1..589 / Pcmv, 653.4250 / Pom121, 4251.4287 / null, 4318.6546 / 3EGFP, 7780.8574 / KanR/NeoR
Продукція
Епідермальний фактор росту (EGF), активність, що стимулює розмноження (MSA), POM121, трансмембрана, нуклеопорин, промотор ЦМВ, неоміцин, фосфотрансфераза

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
ДМЕМ, w: 4,5 г/л Глюкоза, w: 4 мМ L-глутамін, w: 3,7 г/л NaHCO3, w: 1,0 мМ піруват натрію (цит. номер 820300a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS, 0,5 мг/мл G418
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Викиньте старе середовище і промийте клітини PBS. Додайте свіжоприготований 0,025% розчин трипсину/0,02% розчин ЕДТА, нагрітий до 37 градусів Цельсія, і зачекайте, поки клітини відокремляться, що зазвичай займає близько 5 хвилин. Нейтралізуйте трипсин, додавши свіже середовище, потім перенесіть клітинну суміш у пробірку і центрифугуйте. Після центрифугування видаліть надосадову рідину, ресуспендуйте осад клітин у свіжому живильному середовищі та перенесіть суспензію в нові колби. Додайте G418 в культуральне середовище для досягнення кінцевої концентрації 0,5 мг/мл
Щільність висіву
Від 2 до 4 x 104 клітин/см2
Оновлення рідини
2-3 рази на тиждень
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Порода / підвид
Осборн-Мендель