NRK-Pom121-EGFP3

A linha celular NRK-Pom121-EGFP3 é derivada de células normais de rim de rato (NRK) e é geneticamente modificada para expressar a proteína de fusão Pom121-EGFP3. A Pom121 é uma nucleoporina transmembranar que é um componente integral do complexo do poro nuclear (NPC), desempenhando um papel crucial na montagem do envelope nuclear e na função do NPC. A inclusão da etiqueta de proteína fluorescente verde melhorada (EGFP3) facilita a visualização e o estudo da dinâmica, localização e interações da Pom121 em células vivas através de microscopia de fluorescência. Isto faz com que a linha celular NRK-Pom121-EGFP3 seja uma ferramenta valiosa para investigar os mecanismos de transporte nuclear e a arquitetura da NPC.

As células NRK, a linha parental da NRK-Pom121-EGFP3, são normalmente utilizadas em várias aplicações de investigação devido às suas caraterísticas de crescimento estável e morfologia epitelial. A modificação para expressar Pom121-EGFP3 fornece aos investigadores um modelo robusto para examinar os mecanismos moleculares subjacentes ao transporte nucleocitoplasmático, a organização estrutural do NPC e a sua regulação durante a divisão e diferenciação celular. Além disso, esta linha celular pode ser usada para estudar os efeitos de várias perturbações genéticas e farmacológicas na função do NPC, oferecendo informações sobre doenças associadas a defeitos no transporte nuclear, como o cancro e doenças neurodegenerativas.

Em termos gerais, a linha celular NRK-Pom121-EGFP3 representa uma ferramenta sofisticada na biologia celular e na investigação molecular, fornecendo informações de alta resolução sobre os processos dinâmicos que regem as interações nucleocitoplasmáticas. A sua capacidade de permitir a observação em tempo real dos componentes do NPC num contexto celular vivo torna-a inestimável para o avanço da nossa compreensão dos mecanismos de transporte celular e das suas implicações na saúde e na doença.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia