Tartalomra ugrás
NRK-Pom121-EGFP3
Szövet
Vese
Szinonimák
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Dokumentumok

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Termékszám 500669

Az NRK-Pom121-EGFP3 sejtvonal normál patkányvese-sejtekből (NRK) származik, és genetikailag úgy módosították, hogy a Pom121-EGFP3 fúziós fehérjét expresszálja. Pom...

€800.00adó és szállítási költség nélkül
Rendelésre készül
1

01Általános információk

Leírás

Az NRK-Pom121-EGFP3 sejtvonal normál patkányvese (NRK) sejtekből származik, és genetikailag úgy alakították ki, hogy a Pom121-EGFP3 fúziós fehérjét expresszálja. A Pom121 egy transzmembrán nukleoporin, amely a nukleáris póruskomplex (NPC) integráns összetevője, és döntő szerepet játszik a nukleáris burkolás összeszerelésében és az NPC működésében. A fokozott zöld fluoreszcens fehérje (EGFP3) tag beillesztése megkönnyíti a Pom121 dinamikájának, lokalizációjának és kölcsönhatásainak láthatóvá tételét és tanulmányozását élő sejteken belül fluoreszcens mikroszkópia segítségével. Ezáltal az NRK-Pom121-EGFP3 sejtvonal értékes eszközzé válik a nukleáris transzportmechanizmusok és az NPC architektúra vizsgálatához.

Az NRK-Pom121-EGFP3 szülői vonalát, az NRK-Pom121-EGFP3 sejteket stabil növekedési jellemzőik és epiteliális morfológiájuk miatt gyakran használják különböző kutatási alkalmazásokban. A Pom121-EGFP3 expresszálására történő módosítás robusztus modellt biztosít a kutatók számára a nukleocitoplazmatikus transzport alapjául szolgáló molekuláris mechanizmusok, az NPC strukturális szerveződése, valamint a sejtosztódás és differenciálódás során történő szabályozásának vizsgálatához. Emellett ez a sejtvonal felhasználható a különböző genetikai és farmakológiai perturbációk NPC funkcióra gyakorolt hatásának tanulmányozására, betekintést nyújtva a nukleáris transzport hibáival összefüggő betegségekbe, mint például a rák és a neurodegeneratív rendellenességek.

Összességében az NRK-Pom121-EGFP3 sejtvonal a sejtbiológia és a molekuláris kutatás kifinomult eszköze, amely nagy felbontású betekintést nyújt a nukleocitoplazmatikus kölcsönhatásokat szabályozó dinamikus folyamatokba. Az a képessége, hogy lehetővé teszi az NPC komponensek valós idejű megfigyelését élő sejtkörnyezetben, felbecsülhetetlenné teszi a sejtek transzportmechanizmusainak és azok egészségre és betegségekre gyakorolt hatásának megértésében.

Szövet
Vese
Szinonimák
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Osztályozás

Organizmus
Patkány
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Fibroblaszt-szerű, fusiform alakú sejtek

04Azonosítók

Hivatkozás
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion katalógusszám: 500669)
NCBI adóazonosító szám
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Betétes
Az Ellenberg Labor (EMBL)

05Kifejeződés és fogékonyság

Kifejeződő receptorok
Epidermális növekedési faktor (EGF), szaporodást serkentő aktivitás (MSA)
Fehérjeexpresszió
Pom121-EGFP3: Hely/gén: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Termékek
Epidermális növekedési faktor (EGF), szaporodást serkentő aktivitás (MSA), POM121, transzmembrán, nukleoporin, CMV promotor, neomicin, foszfotranszferáz

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel, 0,5 mg/ml G418-zal
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Dobja ki a régi tápfolyadékot, és mossa ki a sejteket PBS-szel. Adjunk hozzá frissen készített 0,025%-os tripszin/0,02%-os EDTA oldatot 37 Celsius-fokra melegítve, és várjuk meg, amíg a sejtek leválnak, ami általában körülbelül 5 percig tart. Semlegesítse a tripszint friss tápfolyadék hozzáadásával, majd helyezze át a sejtkeveréket egy csőbe és centrifugálja. A centrifugálás után távolítsa el a felülúszót, reszuszpendálja a sejtpelletet friss táptalajban, és a szuszpenziót helyezze át új lombikba. Adjunk a táptalajhoz G418-at, hogy 0,5 mg/ml végkoncentrációt érjünk el
Ültetési sűrűség
2–4 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Faj / alfaj
OsborneMendel