Ga naar de inhoud
NRK-Pom121-EGFP3
Weefsel
Nieren
Synoniemen
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Documenten

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Productnummer 500669

De NRK-Pom121-EGFP3-cellijn is afgeleid van normale rattenniercellen (NRK) en is genetisch gemodificeerd om het Pom121-EGFP3-fusie-eiwit tot expressie te brengen. Pom...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De NRK-Pom121-EGFP3 cellijn is afgeleid van normale rattenniercellen (NRK) en is genetisch gemanipuleerd om het Pom121-EGFP3 fusie-eiwit tot expressie te brengen. Pom121 is een transmembraan nucleoporine dat een integraal onderdeel is van het nucleaire poriëncomplex (NPC) en een cruciale rol speelt in de assemblage van de nucleaire envelop en de functie van het NPC. De toevoeging van het verbeterd groen fluorescerend eiwit (EGFP3) vergemakkelijkt de visualisatie en studie van Pom121 dynamica, lokalisatie en interacties binnen levende cellen door middel van fluorescentiemicroscopie. Dit maakt de NRK-Pom121-EGFP3 cellijn een waardevol hulpmiddel voor het onderzoeken van nucleaire transportmechanismen en NPC architectuur.

NRK-cellen, de ouderlijn van NRK-Pom121-EGFP3, worden vaak gebruikt in verschillende onderzoekstoepassingen vanwege hun stabiele groeikenmerken en epitheliale morfologie. De modificatie om Pom121-EGFP3 tot expressie te brengen biedt onderzoekers een robuust model om de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan nucleocytoplasmatisch transport, de structurele organisatie van de NPC en de regulatie ervan tijdens celdeling en differentiatie te onderzoeken. Daarnaast kan deze cellijn gebruikt worden om de effecten van verschillende genetische en farmacologische verstoringen op de NPC-functie te bestuderen, wat inzicht geeft in ziekten die geassocieerd worden met nucleaire transportdefecten, zoals kanker en neurodegeneratieve aandoeningen.

Over het geheel genomen is de NRK-Pom121-EGFP3 cellijn een geavanceerd instrument in de celbiologie en moleculair onderzoek, dat hogeresolutie inzichten geeft in de dynamische processen die nucleocytoplasmatische interacties sturen. De mogelijkheid om NPC componenten in real-time te observeren in een levende cellulaire context maakt het van onschatbare waarde voor het bevorderen van ons begrip van cellulaire transportmechanismen en hun implicaties in gezondheid en ziekte.

Weefsel
Nieren
Synoniemen
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Classificatie

Organisme
Rat
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Fibroblast-achtige cellen met spoelvormige vorm

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion catalogusnummer 500669)
NCBI-belastingnummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Tot expressie gebrachte receptoren
Epidermale groeifactor (EGF), vermeerderingsstimulerende activiteit (MSA)
Eiwit-expressie
Pom121-EGFP3: Locatie/gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Producten
Epidermale groeifactor (EGF), Vermenigvuldigingsstimulerende activiteit (MSA), POM121, Transmembraan, Nucleoporine, CMV Promotor, Neomycine, Fosfotransferase

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Gooi het oude medium weg en was de cellen met PBS. Voeg een vers bereide 0,025% trypsine/0,02% EDTA-oplossing verwarmd tot 37 graden Celsius toe en wacht tot de cellen loskomen, wat meestal ongeveer 5 minuten duurt. Neutraliseer de trypsine door vers medium toe te voegen, breng het celmengsel over naar een buis en centrifugeer. Verwijder na het centrifugeren het supernatant, resuspendeer de celpellet in vers kweekmedium en breng de suspensie over naar nieuwe kolven. Voeg G418 toe aan het kweekmedium om een eindconcentratie van 0,5 mg/ml te bereiken
Zaaidichtheid
2 tot 4 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Soort / ondersoort
OsborneMendel