NRK-Pom121-EGFP3

A linhagem celular NRK-Pom121-EGFP3 é derivada de células renais normais de rato (NRK) e foi geneticamente modificada para expressar a proteína de fusão Pom121-EGFP3. A Pom121 é uma nucleoporina transmembranar que constitui um componente integral do complexo de poros nucleares (NPC), desempenhando um papel crucial na montagem do envelope nuclear e no funcionamento do NPC. A inclusão da marca da proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP3) facilita a visualização e o estudo da dinâmica, localização e interações da Pom121 em células vivas por meio da microscopia de fluorescência. Isso torna a linhagem celular NRK-Pom121-EGFP3 uma ferramenta valiosa para investigar os mecanismos de transporte nuclear e a arquitetura do NPC.

As células NRK, a linhagem parental da NRK-Pom121-EGFP3, são comumente utilizadas em diversas aplicações de pesquisa devido às suas características de crescimento estável e morfologia epitelial. A modificação para expressar Pom121-EGFP3 oferece aos pesquisadores um modelo robusto para examinar os mecanismos moleculares subjacentes ao transporte nucleocitoplasmático, a organização estrutural do NPC e sua regulação durante a divisão e diferenciação celular. Além disso, essa linhagem celular pode ser utilizada para estudar os efeitos de diversas perturbações genéticas e farmacológicas sobre a função do NPC, oferecendo insights sobre doenças associadas a defeitos no transporte nuclear, como câncer e distúrbios neurodegenerativos.

De modo geral, a linha celular NRK-Pom121-EGFP3 representa uma ferramenta sofisticada na biologia celular e na pesquisa molecular, proporcionando insights de alta resolução sobre os processos dinâmicos que regem as interações nucleocitoplasmáticas. Sua capacidade de permitir a observação em tempo real dos componentes do NPC em um contexto celular vivo a torna inestimável para o avanço de nossa compreensão dos mecanismos de transporte celular e suas implicações na saúde e na doença.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.