Pāriet uz saturu
NRK-Pom121-EGFP3
Audums
Nieres
Sinonīmi
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Dokumenti

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Preces numurs 500669

Šūnu līnija NRK-Pom121-EGFP3 ir iegūta no normālu žurku nieru (NRK) šūnām un ģenētiski modificēta, lai ekspresētu Pom121-EGFP3 fūzijas proteīnu. Pom...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

NRK-Pom121-EGFP3 šūnu līnija ir iegūta no normālām žurku nieru (NRK) šūnām un ir ģenētiski veidota, lai ekspresētu Pom121-EGFP3 saplūšanas proteīnu. Pom121 ir transmembrāns nukleoporīns, kas ir neatņemama kodola poru kompleksa (NPC) sastāvdaļa, kam ir būtiska nozīme kodola apvalka montāžā un NPC funkcijās. Pastiprināta zaļā fluorescējoša proteīna (EGFP3) marķējuma iekļaušana atvieglo Pom121 dinamikas, lokalizācijas un mijiedarbības vizualizāciju un izpēti dzīvās šūnās, izmantojot fluorescences mikroskopiju. Tas padara NRK-Pom121-EGFP3 šūnu līniju par vērtīgu instrumentu kodola transporta mehānismu un NPC arhitektūras izpētei.

NRK šūnas, kas ir NRK-Pom121-EGFP3 vecāku līnija, parasti izmanto dažādos pētījumos, pateicoties to stabilām augšanas īpašībām un epitēlija morfoloģijai. Modifikācija, lai ekspresētu Pom121-EGFP3, pētniekiem nodrošina stabilu modeli, lai pētītu molekulāros mehānismus, kas ir pamatā nukleocitoplazmas transportam, NPC strukturālo organizāciju un tās regulāciju šūnu dalīšanās un diferenciācijas laikā. Turklāt šo šūnu līniju var izmantot, lai pētītu dažādu ģenētisku un farmakoloģisku traucējumu ietekmi uz NPC funkciju, sniedzot ieskatu par slimībām, kas saistītas ar kodola transporta defektiem, piemēram, vēzi un neirodeģeneratīviem traucējumiem.

Kopumā NRK-Pom121-EGFP3 šūnu līnija ir sarežģīts šūnu bioloģijas un molekulāro pētījumu rīks, kas nodrošina augstas izšķirtspējas ieskatu dinamiskajos procesos, kuri regulē nukleocitoplazmas mijiedarbību. Tās spēja reāllaikā novērot NPC komponentus dzīvās šūnās padara to nenovērtējamu, lai uzlabotu mūsu izpratni par šūnu transporta mehānismiem un to ietekmi uz veselību un slimībām.

Audums
Nieres
Sinonīmi
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klasifikācija

Organisms
Žurka
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroblastiem līdzīgas šūnas ar fusiformas formu

04Identifikatori

Atsauce
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion kataloga numurs 500669)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
Epidermas augšanas faktors (EGF), multiplikāciju stimulējoša aktivitāte (MSA)
Proteīnu ekspresija
Pom121-EGFP3: Atrašanās vieta/gēns: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Produkti
Epidermas augšanas faktors (EGF), multiplikāciju stimulējoša aktivitāte (MSA), POM121, transmembrāna, nukleoporīns, CMV promotors, neomicīns, fosfotransferāze

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Izmetiet veco barotni un izskalojiet šūnas ar PBS. Pievienojiet svaigi sagatavotu 0,025 % tripsīna/0,02 % EDTA šķīdumu, kas uzsildīts līdz 37 °C temperatūrai, un pagaidiet, līdz šūnas atdalās, kas parasti ilgst apmēram 5 minūtes. Neitralizēt tripsīnu, pievienojot svaigu barotni, pēc tam šūnu maisījumu pārvietot mēģenē un centrifugēt. Pēc centrifugēšanas noņemiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnu granulas svaigā barotnē un pārnesiet suspensiju uz jaunām kolbām. Iekļaut G418 barotnē, lai sasniegtu galīgo koncentrāciju 0,5 mg/ml
Sēšanas blīvums
2 līdz 4 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
OsborneMendel