Mine otse sisu juurde
NRK-Pom121-EGFP3
Kude
Neerud
Sünonüümid
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Dokumendid

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Toote number 500669

Rakuliin NRK-Pom121-EGFP3 on saadud normaalsetest roti neerurakkudest (NRK) ja on geneetiliselt muundatud nii, et see ekspresseerib Pom121-EGFP3-fusioonvalku. Pom...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NRK-Pom121-EGFP3 rakuliin on saadud normaalsetest roti neerurakkudest (NRK) ja on geneetiliselt muundatud, et ekspresseerida Pom121-EGFP3 fusioonvalku. Pom121 on transmembraanne nukleoporiin, mis on tuumapoorikompleksi (NPC) lahutamatu osa, millel on oluline roll tuumakesta kokkupanekul ja NPC funktsioonis. Tugevdatud rohelise fluorestseeruva valgu (EGFP3) lisamine hõlbustab Pom121 dünaamika, lokaliseerimise ja interaktsioonide visualiseerimist ja uurimist elusrakus fluorestsentsmikroskoopia abil. See muudab NRK-Pom121-EGFP3 rakuliini väärtuslikuks vahendiks tuuma transpordimehhanismide ja NPC arhitektuuri uurimiseks.

NRK-Pom121-EGFP3 vanemliin NRK-Pom121-EGFP3 on tänu oma stabiilsetele kasvuomadustele ja epiteeli morfoloogiale üldkasutatav mitmesugustes teadusuuringutes. Pom121-EGFP3 ekspressiooni muutmine annab teadlastele tugeva mudeli, et uurida nukleotsütoplasma transpordi aluseks olevaid molekulaarmehhanisme, NPC struktuurilist korraldust ja selle regulatsiooni rakkude jagunemise ja diferentseerumise ajal. Lisaks saab seda rakuliini kasutada erinevate geneetiliste ja farmakoloogiliste häirete mõju uurimiseks NPC funktsioonile, mis annab ülevaate tuuma transpordi defektidega seotud haigustest, nagu vähk ja neurodegeneratiivsed häired.

Kokkuvõttes on NRK-Pom121-EGFP3 rakuliin keerukas vahend rakubioloogias ja molekulaaruuringutes, mis annab kõrge resolutsiooniga ülevaate tuumasütoplasma interaktsioone reguleerivatest dünaamilistest protsessidest. Selle võime võimaldada NPC komponentide reaalajas jälgimist elusraku kontekstis muudab selle asendamatuks, et edendada meie arusaamist rakutranspordi mehhanismidest ja nende mõjust tervisele ja haigustele.

Kude
Neerud
Sünonüümid
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klassifikatsioon

Organism
Rott
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastitaolised fusiformse kujuga rakud

04Tunnused

Viide
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytioni katalooginumber 500669)
NCBI maksukood
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Ekspresseeritud retseptorid
Epidermise kasvufaktor (EGF), paljunemist stimuleeriv toime (MSA)
Valgu ekspressioon
Pom121-EGFP3: Asukoht/geen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Tooted
Epidermise kasvufaktor (EGF), paljunemist stimuleeriv aktiivsus (MSA), POM121, transmembraan, nukleoporiin, CMV promotor, neomütsiin, fosfotransferaas

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS, 0,5 mg/ml G418-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Visake vana söötme ära ja peske rakud PBSiga. Lisage värskelt valmistatud 0,025% trüpsiini/0,02% EDTA lahust, mida on kuumutatud 37 kraadini, ja oodake, kuni rakud eralduvad, mis tavaliselt võtab umbes 5 minutit. Neutraliseerige trüpsiin, lisades värsket keskkonda, seejärel viige rakusegu katseklaasi ja tsentrifuugige. Pärast tsentrifuugimist eemaldage supernatant, resuspenseerige rakupellet värskes söötmes ja viige suspensioon uutesse kolvidesse. Lisage G418 kultuurikeskkonda, et saavutada lõppkontsentratsioon 0,5 mg/ml
Külvitihedus
2 kuni 4 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
OsborneMendel