Zum Inhalt springen
NRK-Pom121-EGFP3
Gewebe
Niere
Synonyme
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Dokumente

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Artikelnummer 500669

Die Zelllinie NRK-Pom121-EGFP3 stammt aus normalen Rattennierenzellen (NRK) und wurde gentechnisch so verändert, dass sie das Pom121-EGFP3-Fusionsprotein exprimiert. Pom...

€800.00zzgl. MwSt. und Versandkosten

Anpassung / Empfehlungen

Auftragsfertigung
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die NRK-Pom121-EGFP3-Zelllinie stammt von normalen Rattennierenzellen (NRK) und wurde gentechnisch so verändert, dass sie das Fusionsprotein Pom121-EGFP3 exprimiert. Pom121 ist ein Transmembran-Nukleoporin, das ein integraler Bestandteil des Kernporenkomplexes (NPC) ist und eine entscheidende Rolle beim Aufbau der Kernhülle und der Funktion des NPC spielt. Die Aufnahme des EGFP3-Tags (Enhanced Green Fluorescent Protein) erleichtert die Visualisierung und Untersuchung der Dynamik, Lokalisierung und Interaktionen von Pom121 in lebenden Zellen durch Fluoreszenzmikroskopie. Dies macht die NRK-Pom121-EGFP3-Zelllinie zu einem wertvollen Werkzeug für die Untersuchung von Kerntransportmechanismen und der NPC-Architektur.

NRK-Zellen, die Elternlinie von NRK-Pom121-EGFP3, werden aufgrund ihrer stabilen Wachstumseigenschaften und epithelialen Morphologie häufig in verschiedenen Forschungsanwendungen eingesetzt. Die Modifikation zur Expression von Pom121-EGFP3 bietet Forschern ein robustes Modell zur Untersuchung der molekularen Mechanismen, die dem nukleozytoplasmatischen Transport, der strukturellen Organisation des NPC und seiner Regulierung während der Zellteilung und -differenzierung zugrunde liegen. Darüber hinaus kann diese Zelllinie verwendet werden, um die Auswirkungen verschiedener genetischer und pharmakologischer Störungen auf die NPC-Funktion zu untersuchen, was Einblicke in Krankheiten ermöglicht, die mit Defekten des Kerntransports einhergehen, wie Krebs und neurodegenerative Erkrankungen.

Insgesamt stellt die NRK-Pom121-EGFP3-Zelllinie ein hochentwickeltes Werkzeug für die Zellbiologie und die Molekularforschung dar, das hochauflösende Einblicke in die dynamischen Prozesse gewährt, die die nukleozytoplasmatischen Interaktionen steuern. Ihre Fähigkeit, NPC-Komponenten in Echtzeit in einem lebenden zellulären Kontext zu beobachten, macht sie von unschätzbarem Wert für ein besseres Verständnis der zellulären Transportmechanismen und ihrer Auswirkungen auf Gesundheit und Krankheit.

Gewebe
Niere
Synonyme
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klassifizierung

Organismus
Ratte
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblastenähnliche Zellen mit fusiformer Form

04Bezeichner

Quellenangabe
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion-Katalognummer 500669)
NCBI-Steuer-ID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF), Multiplikationsstimulierende Aktivität (MSA)
Proteinexpression
Pom121-EGFP3: Ort/Gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Produkte
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF), Multiplikationsstimulierende Aktivität (MSA), POM121, Transmembran, Nucleoporin, CMV Promotor, Neomycin, Phosphotransferase

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Verwerfen Sie das alte Medium und waschen Sie die Zellen mit PBS. Geben Sie eine frisch zubereitete, auf 37 Grad Celsius erhitzte 0,025%ige Trypsin/0,02%ige EDTA-Lösung hinzu und warten Sie, bis sich die Zellen ablösen, was in der Regel etwa 5 Minuten dauert. Neutralisieren Sie das Trypsin durch Zugabe von frischem Medium, überführen Sie das Zellgemisch in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie es. Nach der Zentrifugation den Überstand abnehmen, das Zellpellet in frischem Kulturmedium resuspendieren und die Suspension in neue Kolben überführen. G418 in das Kulturmedium einbringen, um eine Endkonzentration von 0,5 mg/ml zu erreichen
Aussaatdichte
2 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
OsborneMendel