Langsung ke isi
NRK-Pom121-EGFP3
Tisu
Ginjal
Sinonim
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Nomor produk 500669

Garis sel NRK-Pom121-EGFP3 berasal dari sel ginjal tikus normal (NRK) dan telah dimodifikasi secara genetik agar dapat mengekspresikan protein fusi Pom121-EGFP3. Pom...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim
Dibuat sesuai pesanan
1

01Informasi umum

Deskripsi

Garis sel NRK-Pom121-EGFP3 berasal dari sel ginjal tikus normal (NRK) dan direkayasa secara genetik untuk mengekspresikan protein fusi Pom121-EGFP3. Pom121 adalah nukleoporin transmembran yang merupakan komponen integral dari kompleks pori nuklir (NPC), yang memainkan peran penting dalam perakitan selubung nuklir dan fungsi NPC. Dimasukkannya tag protein fluoresen hijau yang disempurnakan (EGFP3) memfasilitasi visualisasi dan studi dinamika, lokalisasi, dan interaksi Pom121 dalam sel hidup melalui mikroskop fluoresensi. Hal ini menjadikan garis sel NRK-Pom121-EGFP3 sebagai alat yang berharga untuk menyelidiki mekanisme transpor nuklir dan arsitektur NPC.

Sel NRK, garis induk NRK-Pom121-EGFP3, umumnya digunakan dalam berbagai aplikasi penelitian karena karakteristik pertumbuhannya yang stabil dan morfologi epitelnya. Modifikasi untuk mengekspresikan Pom121-EGFP3 memberi para peneliti model yang kuat untuk memeriksa mekanisme molekuler yang mendasari transpor nukleositoplasma, organisasi struktural NPC, dan regulasi selama pembelahan dan diferensiasi sel. Selain itu, garis sel ini dapat digunakan untuk mempelajari efek dari berbagai gangguan genetik dan farmakologis pada fungsi NPC, menawarkan wawasan tentang penyakit yang terkait dengan cacat transpor nuklir, seperti kanker dan gangguan neurodegeneratif.

Secara keseluruhan, garis sel NRK-Pom121-EGFP3 mewakili alat canggih dalam biologi sel dan penelitian molekuler, memberikan wawasan resolusi tinggi ke dalam proses dinamis yang mengatur interaksi nukleositoplasma. Kemampuannya untuk memungkinkan pengamatan komponen NPC secara real-time dalam konteks seluler langsung membuatnya sangat berharga untuk memajukan pemahaman kita tentang mekanisme transportasi seluler dan implikasinya dalam kesehatan dan penyakit.

Tisu
Ginjal
Sinonim
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klasifikasi

Organisme
Tikus
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Sel mirip fibroblas dengan bentuk fusiform

04Pengidentifikasi

Referensi
NRK-Pom121-EGFP3 (Nomor katalog Cytion 500669)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Nasabah penyimpanan
Laboratorium Ellenberg (Ellenberg Lab) (EMBL)

05Ekspresi dan kerentanan

Reseptor yang diekspresikan
Faktor pertumbuhan epidermal (EGF), aktivitas stimulasi multiplikasi (MSA)
Ekspresi protein
Pom121-EGFP3: Lokasi/Gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR / NeoR
Produk
Faktor pertumbuhan epidermal (EGF), aktivitas perangsang multiplikasi (MSA), POM121, Transmembran, Nukleoporin, Promotor CMV, Neomisin, Fosfotransferase

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dan cuci sel dengan PBS. Tambahkan larutan tripsin 0,025% / 0,02% EDTA yang baru disiapkan yang dipanaskan hingga 37 derajat Celcius dan tunggu hingga sel terlepas, yang biasanya membutuhkan waktu sekitar 5 menit. Netralkan tripsin dengan menambahkan medium segar, lalu pindahkan campuran sel ke dalam tabung dan sentrifugasi. Setelah sentrifugasi, keluarkan supernatan, resuspensi pelet sel dalam media kultur segar, dan pindahkan suspensi ke labu baru. Masukkan G418 ke dalam media kultur untuk mencapai konsentrasi akhir 0,5 mg / ml
Kepadatan penanaman
2 hingga 4 x 10⁴ sel/cm²
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Jenis / subspesies
OsborneMendel