Gå direkt till innehållet
NRK-Pom121-EGFP3
Vävnad
Njurar
Synonymer
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Produktnummer 500669

Cellinjen NRK-Pom121-EGFP3 härstammar från normala njurceller från råtta (NRK) och har genetiskt modifierats för att uttrycka fusionsproteinet Pom121-EGFP3. Pom...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Tillverkas på beställning
1

01Allmän information

Beskrivning

Cellinjen NRK-Pom121-EGFP3 härrör från normala råttnjurceller (NRK) och är genetiskt modifierad för att uttrycka fusionsproteinet Pom121-EGFP3. Pom121 är en transmembran nukleoporin som är en integrerad komponent i kärnporskomplexet (NPC) och spelar en avgörande roll för kärnhöljets sammansättning och NPC:s funktion. Inkluderingen av EGFP3-taggen (Enhanced Green Fluorescent Protein) underlättar visualisering och studier av Pom121:s dynamik, lokalisering och interaktioner i levande celler genom fluorescensmikroskopi. Detta gör NRK-Pom121-EGFP3-cellinjen till ett värdefullt verktyg för att undersöka mekanismer för kärntransport och NPC-arkitektur.

NRK-celler, föräldralinjen till NRK-Pom121-EGFP3, används ofta i olika forskningsapplikationer på grund av sina stabila tillväxtegenskaper och epitelmorfologi. Modifieringen för att uttrycka Pom121-EGFP3 ger forskare en robust modell för att undersöka de molekylära mekanismer som ligger till grund för nukleocytoplasmisk transport, den strukturella organisationen av NPC och dess reglering under celldelning och differentiering. Dessutom kan denna cellinje användas för att studera effekterna av olika genetiska och farmakologiska störningar på NPC-funktionen, vilket ger insikter om sjukdomar som är förknippade med kärntransportdefekter, såsom cancer och neurodegenerativa sjukdomar.

Sammantaget utgör cellinjen NRK-Pom121-EGFP3 ett sofistikerat verktyg inom cellbiologi och molekylär forskning, som ger högupplösta insikter i de dynamiska processer som styr nukleocytoplasmatiska interaktioner. Dess förmåga att möjliggöra realtidsobservation av NPC-komponenter i ett levande cellulärt sammanhang gör den ovärderlig för att främja vår förståelse av cellulära transportmekanismer och deras konsekvenser för hälsa och sjukdom.

Vävnad
Njurar
Synonymer
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klassificering

Organism
Råtta
Tillväxtegenskaper
Följsam
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Fibroblastliknande celler med fusiform form

04Identifierare

Källa
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion katalognummer 500669)
NCBI-skattenummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttryck och mottaglighet

Receptorer som uttrycks
Epidermal tillväxtfaktor (EGF), multiplikationsstimulerande aktivitet (MSA)
Proteinexpression
Pom121-EGFP3: Plats/Gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Produkter
Epidermal tillväxtfaktor (EGF), multiplikationsstimulerande aktivitet (MSA), POM121, transmembran, nukleoporin, CMV-promotor, neomycin, fosfotransferas

06Hantering och odling

Odlingsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukos, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Kassera det gamla mediet och tvätta cellerna med PBS. Tillsätt en nyberedd 0,025% trypsin/0,02% EDTA-lösning som värmts upp till 37 grader Celsius och vänta tills cellerna lossnar, vilket vanligtvis tar cirka 5 minuter. Neutralisera trypsinet genom att tillsätta färskt medium, överför sedan cellblandningen till ett rör och centrifugera. Efter centrifugeringen avlägsnas supernatanten, cellpelleten resuspenderas i färskt odlingsmedium och suspensionen överförs till nya kolvar. Tillsätt G418 i odlingsmediet för att uppnå en slutlig koncentration på 0,5 mg/ml
Såtäthet
2 till 4 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Ras / underart
OsborneMendel