Gå til innholdet
NRK-Pom121-EGFP3
Vev
Nyre
Synonymer
NRK Pom121-EGFP3, NRK Pom121-3EGFP, NRK-Pom121-3EGFP

Dokumenter

NRK-Pom121-EGFP3

Cell line · Produktnummer 500669

Cellelinjen NRK-Pom121-EGFP3 stammer fra normale rottenyreceller (NRK) og er genetisk modifisert til å uttrykke fusjonsproteinet Pom121-EGFP3. Pom...

€800.00ekskl. mva. og frakt
Lages på bestilling
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

NRK-Pom121-EGFP3-cellelinjen er avledet fra normale rottenyreceller (NRK) og er genetisk konstruert for å uttrykke fusjonsproteinet Pom121-EGFP3. Pom121 er et transmembran nukleoporin som er en integrert komponent i kjerneporkomplekset (NPC), og som spiller en avgjørende rolle i oppbyggingen av kjerneskjoldet og NPC-funksjonen. Inkluderingen av EGFP3-taggen (Enhanced Green Fluorescent Protein) gjør det enklere å visualisere og studere Pom121s dynamikk, lokalisering og interaksjoner i levende celler ved hjelp av fluorescensmikroskopi. Dette gjør NRK-Pom121-EGFP3-cellelinjen til et verdifullt verktøy for å undersøke nukleære transportmekanismer og NPC-arkitektur.

NRK-celler, som er foreldrelinjen til NRK-Pom121-EGFP3, brukes ofte i ulike forskningsapplikasjoner på grunn av sine stabile vekstegenskaper og epitelmorfologi. Modifiseringen til å uttrykke Pom121-EGFP3 gir forskere en robust modell for å undersøke de molekylære mekanismene som ligger til grunn for nukleocytoplasmatisk transport, den strukturelle organiseringen av NPC og dens regulering under celledeling og differensiering. I tillegg kan denne cellelinjen brukes til å studere effekten av ulike genetiske og farmakologiske forstyrrelser på NPC-funksjonen, noe som gir innsikt i sykdommer som er forbundet med nukleærtransportdefekter, for eksempel kreft og nevrodegenerative lidelser.

Alt i alt representerer NRK-Pom121-EGFP3-cellelinjen et sofistikert verktøy innen cellebiologi og molekylær forskning, som gir høyoppløselig innsikt i de dynamiske prosessene som styrer nukleocytoplasmatiske interaksjoner. Muligheten til å observere NPC-komponenter i sanntid i en levende cellulær kontekst gjør den uvurderlig for å øke vår forståelse av cellulære transportmekanismer og deres betydning for helse og sykdom.

Vev
Nyre
Synonymer
  • NRK Pom121-EGFP3
  • NRK Pom121-3EGFP
  • NRK-Pom121-3EGFP

02Klassifisering

Organisme
Rotte
Vekstegenskaper
Tilhenger
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Fibroblastlignende celler med fusiform form

04Identifikatorer

Kildehenvisning
NRK-Pom121-EGFP3 (Cytion katalognummer 500669)
NCBI-skattenummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV96
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Reseptorer som uttrykkes
Epidermal vekstfaktor (EGF), multiplikasjonsstimulerende aktivitet (MSA)
Proteinekspresjon
Pom121-EGFP3: Beliggenhet/Gen: 1..589 / Pcmv, 653..4250 / Pom121, 4251..4287 / null, 4318..6546 / 3EGFP, 7780..8574 / KanR/NeoR
Produkter
Epidermal vekstfaktor (EGF), multiplikasjonsstimulerende aktivitet (MSA), POM121, transmembran, nukleoporin, CMV-promotor, neomycin, fosfotransferase

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Kast det gamle mediet, og vask cellene med PBS. Tilsett en nytilberedt 0,025 % trypsin/0,02 % EDTA-løsning oppvarmet til 37 grader Celsius, og vent til cellene løsner, noe som vanligvis tar ca. 5 minutter. Nøytraliser trypsinet ved å tilsette nytt medium, og overfør deretter celleblandingen til et rør og sentrifuger. Etter sentrifugering fjerner du supernatanten, resuspenderer cellepelleten i nytt dyrkingsmedium og overfører suspensjonen til nye kolber. Tilsett G418 i dyrkningsmediet for å oppnå en sluttkonsentrasjon på 0,5 mg/ml
Såtetthet
2 til 4 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Rase / underart
OsborneMendel