İçeriğe atla
B-LCL-CDG7
Doku
Periferik kan
Hastalık
Doğuştan Glikozilasyon Bozuklukları

Belgeler

B-LCL-CDG7

Cell line · Ürün numarası 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

€800.00vergi ve kargo hariç

Kişiselleştirme / Öneriler

Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama
B-LCL-CDG7, CDAII hastası genç bir erkek çocuktan elde edilen EBV ile transforme edilmiş bir B lenfosit hücre hattıdır. CDAII, CDG glikozilasyon bozuklukları sınıfına bağlı nadir bir genetik anemidir. CDAII hastalarında, hücre içi protein taşıma sisteminde (özellikle ER'den veziküler tomurcuklanma) yer alan COPII bileşeni SEC23B geninde bir kusur vardır. İlgili hasta bu gendeki mutasyon için homozigottur. Eritrosit membranlarının bant 3 glikoproteini, glikoproteinlerin polilaktozamin motiflerinin anormal glikozilasyonu ile glikozillenir, ancak glikosfingolipidlerin glikozillenmez, bu nedenle CDA II eritrositlerinin bant 3'ü kesilmiş hibrit tip oligosakkaritlere sahiptir. Bu da Golgi glikozilasyon enzimlerinden Beta-mannosidaz II veya Nacetylglucosaminyltransferase II'de ek bir kusur olduğuna işaret etmektedir.
Doku
Periferik kan
Hastalık
Doğuştan Glikozilasyon Bozuklukları
Uygulamalar
Bağışıklık hücrelerinde CDG etkilerinin genotiplendirilmesi, fonksiyonel testler (örn. B hücresi yüzey antijenleri), sitotoksik ilaçların test edilmesi, mutasyon analizi, apoptotik mekanizmaların analizi, HLA tiplendirmesi, farklı hücresel glikoproteinlerin kusurlu glikozilasyonunun çeşitli fonksiyonlar üzerindeki etkisi.

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Erkek
Büyüme özellikleri
Askıya alma
Biyogüvenlik seviyesi
2

03Özellikler

Morfoloji
Yuvarlak hücreler
Hücre türü
B lenfosit

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
B-LCL-CDG7 (Cytion katalog numarası 302018)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05İfade ve duyarlılık

Yüzey antijenleri
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (sialylated Lewis x)-, CD75s (sialylated lactosaminyl Noligosccharides)+, CD173 (kan grubu H)-, CD174 (kan grubu Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialylated Tn)-, CD176 (TF)+
Antijen ekspresyonu
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC Sınıf I+, MHC Sınıf II (HLA-DR)+
Virüsler
Transformant: EBV

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
RPMI 1640, w: 2.0 mM stabil Glutamin, w: 2.0 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820700a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 ısıyla inaktive edilmiş FBS ile destekleyin
Alt kültür oluşturma
Kültürleri, besiyerini periyodik olarak ekleyerek veya değiştirerek muhafaza edin. Kültürleri 2 x 105 hücre/ml yoğunlukta başlatın ve optimal büyüme için hücre konsantrasyonunu 1 x 105 ila 5 x 105 hücre/ml aralığında tutun.
Sıvı değişimi
Orta renk sarıya dönüştüğünde
Çözülme sonrası toparlanma
Orta
Çözme ve kültürleme

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
Çocuk
Etnik köken
Kafkas