Přejít na obsah
B-LCL-CDG7
Tkáň
Periferní krev
Nemoc
Vrozené poruchy glykosylace

Dokumenty

B-LCL-CDG7

Cell line · Číslo výrobku 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

€800.00bez DPH a poštovného

Přizpůsobení / Doporučení

Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis
B-LCL-CDG7 je buněčná linie B lymfocytů transformovaná EBV odvozená od mladého chlapce s CDAII. CDAII je vzácná genetická anémie, která patří do skupiny poruch glykosylace CDG. Pacienti s CDAII mají defekt v genu SEC23B, který je součástí COPII komponenty a podílí se na systému vnitrobuněčného transportu proteinů (zejména vezikulárního pučení z ER). Příslušný pacient je homozygot pro mutaci v tomto genu. Glykoprotein band 3 erytrocytárních membrán je nedostatečně glykosylován aberantní glykosylací polylaktosaminových motivů glykoproteinů, ale nikoliv glykosfingolipidů, proto má band 3 erytrocytů CDA II zkrácené oligosacharidy hybridního typu. To ukazuje na další defekt v Golgiho glykosylačních enzymech Beta-mannosidáze II nebo Nacetylglukosaminyltransferáze II.
Tkáň
Periferní krev
Nemoc
Vrozené poruchy glykosylace
Aplikace
Genotypizace účinků CDG v imunitních buňkách, funkční testování (např. povrchových antigenů B buněk), testování cytotoxických léčiv, mutační analýza, analýza apoptotických mechanismů, typizace HLA, vliv defektní glykosylace různých buněčných glykoproteinů na různé funkce.

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Odpružení
Úroveň biologické bezpečnosti
2

03Charakteristika

Morfologie
Kulaté buňky
Typ buňky
B lymfocyty

04Identifikátory

Citace
B-LCL-CDG7 (katalogové číslo Cytion 302018)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05Exprese a náchylnost

Povrchové antigeny
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (sialylovaný Lewis x)-, CD75s (sialylované laktosaminyl-noligoscharidy)+, CD173 (krevní skupina H)-, CD174 (krevní skupina Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialylovaný Tn)-, CD176 (TF)+
Exprese antigenu
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC třídy I+, MHC třídy II (HLA-DR)+
Viry
Transformant: EBV

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilní glutamin, w: 2,0 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10 % tepelně inaktivovaného FBS
Subkultivace
Kultury udržujte pravidelným přidáváním nebo výměnou média. Kultury zahajte s hustotou 2 x 105 buněk/ml a pro optimální růst udržujte koncentraci buněk v rozmezí 1 x 105 až 5 x 105 buněk/ml.
Obnova tekutin
Jakmile se barva média změnila na žlutou
Zotavení po rozmrazení
Střední
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
Dítě
Etnická příslušnost
Kavkazský