Przejdź do treści
B-LCL-CDG7
Chusteczka
Krew obwodowa
Choroba
Wrodzone zaburzenia glikozylacji

Dokumenty

B-LCL-CDG7

Cell line · Numer produktu 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki

Dostosowanie / Zalecenia

W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
1

01Informacje ogólne

Opis
B-LCL-CDG7 to linia komórkowa limfocytów B transformowanych wirusem EBV pochodząca od młodego chłopca z CDAII. CDAII jest rzadką niedokrwistością genetyczną, należącą do klasy zaburzeń glikozylacji CDG. Pacjenci z CDAII mają defekt w genie SEC23B składnika COPII, który jest zaangażowany w wewnątrzkomórkowy system transportu białek (w szczególności pączkowanie pęcherzykowe z ER). Pacjent jest homozygotą pod względem mutacji w tym genie. Glikoproteina pasma 3 błon erytrocytów jest słabo glikozylowana przez nieprawidłową glikozylację motywów polilaktozaminy glikoprotein, ale nie glikosfingolipidów, dlatego pasmo 3 erytrocytów CDA II ma skrócone oligosacharydy typu hybrydowego. Wskazuje to na dodatkowy defekt enzymów glikozylacji Golgiego: beta-mannozydazy II lub nacetyloglukozaminylotransferazy II.
Chusteczka
Krew obwodowa
Choroba
Wrodzone zaburzenia glikozylacji
Zastosowania
Genotypowanie efektów CDG w komórkach odpornościowych, testy funkcjonalne (np. antygeny powierzchniowe komórek B), testowanie leków cytotoksycznych, analiza mutacji, analiza mechanizmów apoptotycznych, typowanie HLA, wpływ wadliwej glikozylacji różnych glikoprotein komórkowych na różne funkcje.

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Mężczyzna
Właściwości związane ze wzrostem
Zawieszenie
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
2

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Okrągłe komórki
Typ komórki
Limfocyt B

04Identyfikatory

Źródło
B-LCL-CDG7 (numer katalogowy Cytion 302018)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05Ekspresja i podatność

Antygeny powierzchniowe
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (sialilowany Lewis x)-, CD75s (sialilowane laktozoaminylowe noligosacharydy)+, CD173 (grupa krwi H)-, CD174 (grupa krwi Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialilowany Tn)-, CD176 (TF)+
Ekspresja antygenu
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC klasy I+, MHC klasy II (HLA-DR)+
Wirusy
Transformant: EBV

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS inaktywowanym termicznie
Hodowla komórek w subkulturze
Utrzymuj kultury poprzez okresowe dodawanie lub wymianę pożywki. Rozpocznij hodowlę od gęstości 2 x 105 komórek/ml i utrzymuj stężenie komórek w zakresie od 1 x 105 do 5 x 105 komórek/ml, aby uzyskać optymalny wzrost.
Odnawianie płynów
Gdy średni kolor zmieni się w żółty
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Średni
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Dziecko
Pochodzenie etniczne
Kaukaski