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B-LCL-CDG7
Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
Angeborene Störungen der Glykosylierung

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B-LCL-CDG7

Cell line · Artikelnummer 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung
B-LCL-CDG7 ist eine EBV-transformierte B-Lymphozyten-Zelllinie, die von einem kleinen Jungen mit CDAII stammt. CDAII ist eine seltene genetische Anämie, die der Klasse der CDG-Glykosylierungsstörungen angehört. CDAII-Patienten haben einen Defekt im Gen für die COPII-Komponente SEC23B, die am intrazellulären Proteintransportsystem beteiligt ist (insbesondere an der vesikulären Knospung aus dem ER). Der betreffende Patient ist homozygot für die Mutation in diesem Gen. Das Band 3-Glykoprotein der Erythrozytenmembranen ist durch eine aberrante Glykosylierung der Polylactosamin-Motive der Glykoproteine, nicht aber der Glykosphingolipide, unterglykosyliert, so dass Band 3 der CDA II-Erythrozyten verkürzte Oligosaccharide vom Hybridtyp aufweist. Dies deutet auf einen zusätzlichen Defekt der Golgi-Glykosylierungsenzyme Beta-Mannosidase II oder Nacetylglucosaminyltransferase II hin.
Gewebe
Peripheres Blut
Krankheit
Angeborene Störungen der Glykosylierung
Anwendungen
Genotypisierung von CDG-Effekten in Immunzellen, Funktionstests (z. B. B-Zell-Oberflächenantigene), Tests von zytotoxischen Medikamenten, Mutationsanalyse, Analyse apoptotischer Mechanismen, HLA-Typisierung, Auswirkungen defekter Glykosylierung verschiedener zellulärer Glykoproteine auf verschiedene Funktionen.

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Aussetzung
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Runde Zellen
Zelltyp
B-Lymphozyt

04Bezeichner

Quellenangabe
B-LCL-CDG7 (Cytion-Katalognummer 302018)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05Expression und Anfälligkeit

Oberflächenantigene
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (sialyliertes Lewis x)-, CD75s (sialylierte Lactosaminyl-Noligosccharide)+, CD173 (Blutgruppe H)-, CD174 (Blutgruppe Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialyliertes Tn)-, CD176 (TF)+
Antigenexpression
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC Klasse I+, MHC Klasse II (HLA-DR)+
Viren
Transformant: EBV

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% hitzeinaktiviertem FBS
Subkultivierung
Halten Sie die Kulturen aufrecht, indem Sie regelmäßig Medium hinzufügen oder austauschen. Beginnen Sie die Kulturen mit einer Dichte von 2 x 105 Zellen/ml und halten Sie die Zellkonzentration im Bereich von 1 x 105 bis 5 x 105 Zellen/ml, um ein optimales Wachstum zu erzielen.
Flüssigkeitswechsel
Sobald die mittlere Farbe in Gelb übergeht
Erholung nach dem Auftauen
Mittel
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Kind
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch