Mine otse sisu juurde
B-LCL-CDG7
Kude
Perifeerne veri
Haigus
Glükosüülimise kaasasündinud häired

Dokumendid

B-LCL-CDG7

Cell line · Toote number 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus
B-LCL-CDG7 on EBV transformeeritud B-lümfotsüütide rakuliin, mis on saadud CDAII haigusega noorelt poisilt. CDAII on haruldane geneetiline aneemia, mis kuulub CDG glükosüülimishäirete klassi. CDAII patsientidel on defekt COPII komponendi SEC23B geenis, mis osaleb rakusiseses valkude transpordisüsteemis (eelkõige vesikulaarne pungerumine ER-st). Vastav patsient on selle geeni mutatsiooni suhtes homosügootne. Erütrotsüütide membraanide glükoproteiini 3. riba on allglükosüülitud, kuna glükoproteiinide polülaktosamiinimotiivid, kuid mitte glükosfingolipiidid on aberrantselt glükosüülitud, seega on CDA II erütrotsüütide 3. riba hübriid-tüüpi oligosahhariidid kärbitud. See viitab täiendavale defektile Golgi glükosüülimise ensüümides beetamannosidaas II või natsetüülglükosaminüültransferaas II.
Kude
Perifeerne veri
Haigus
Glükosüülimise kaasasündinud häired
Rakendused
CDG mõju genotüpiseerimine immuunrakkudes, funktsionaalne testimine (nt B-rakkude pinnaantigeenid), tsütotoksiliste ravimite testimine, mutatsioonianalüüs, apoptootiliste mehhanismide analüüs, HLA-tüübi määramine, erinevate rakuliste glükoproteiinide defektse glükosüülimise mõju erinevatele funktsioonidele.

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Vedrustus
Bioloogilise ohutuse tase
2

03Omadused

Morfoloogia
Ümmargused rakud
Rakutüüp
B-lümfotsüüt

04Tunnused

Viide
B-LCL-CDG7 (Cytioni katalooginumber 302018)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Pinnaantigeenid
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (sialüülitud Lewis x)-, CD75s (sialüülitud laktosaminüül noligoskoosiidid)+, CD173 (veregrupp H)-, CD174 (veregrupp Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialüülitud Tn)-, CD176 (TF)+
Antigeeni ekspressioon
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC klassi I+, MHC klassi II (HLA-DR)+
Viirused
Transformant: EBV

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% soojusinaktiveeritud FBS-iga
Kultuuri edasikasvatamine
Säilitage kultuure, lisades või asendades perioodiliselt kasvukeskkonda. Alustage kultuuride kasvatamist tihedusega 2 x 105 rakku/ml ja hoidke rakkude kontsentratsioon vahemikus 1 x 105 kuni 5 x 105 rakku/ml optimaalse kasvu tagamiseks.
Vedeliku vahetus
Kui keskmine värv muutus kollaseks
Taastumine pärast sulamist
Keskmine
Sulatamine ja kasvatamine

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Laps
Etniline kuuluvus
Kaukaasia