Ga naar de inhoud
B-LCL-CDG7
Weefsel
Perifeer bloed
Ziekte
Aangeboren stoornissen van glycosylering

Documenten

B-LCL-CDG7

Cell line · Productnummer 302018

B-LCL-CDG7 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young boy with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG ...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving
B-LCL-CDG7 is een EBV-getransformeerde B-lymfocytencellijn afkomstig van een jongen met CDAII. CDAII is een zeldzame genetische anemie die behoort tot de klasse van CDG-glycosyleringsstoornissen. CDAII-patiënten hebben een defect in het COPII-component SEC23B-gen dat betrokken is bij het intracellulaire eiwittransportsysteem (met name vesiculaire budding vanuit ER). De betreffende patiënt is homozygoot voor de mutatie in dit gen. Band 3 glycoproteïne van erytrocyt membranen is ondergeglycosyleerd door afwijkende glycosylering van polylactosamine motieven van glycoproteïnen maar niet van glycosfingolipiden, dus band 3 van CDA II erytrocyten hebben afgeknotte hybride-type oligosacchariden. Dit wijst op een aanvullend defect in de Golgi-glycosyleringsenzymen Beta-mannosidase II of Nacetylglucosaminyltransferase II.
Weefsel
Perifeer bloed
Ziekte
Aangeboren stoornissen van glycosylering
Toepassingen
Genotypering van CDG-effecten in immuuncellen, functionele testen (bv. B-celoppervlakteantigenen), testen van cytotoxische geneesmiddelen, mutatieanalyse, analyse van apoptotische mechanismen, HLA-typering, impact van defecte glycosylering van verschillende cellulaire glycoproteïnen op diverse functies.

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Ophanging
Bioveiligheidsniveau
2

03Kenmerken

Morfologie
Ronde cellen
Celtype
B-lymfocyt

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
B-LCL-CDG7 (Cytion catalogusnummer 302018)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y3

05Expressie en vatbaarheid

Oppervlakte-antigenen
CD15 (Lewis x)(+), CD15s (gesialyleerde Lewis x)-, CD75s (gesialyleerde lactosaminyl-noligoscchariden)+, CD173 (bloedgroep H)-, CD174 (bloedgroep Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (gesialyleerde Tn)-, CD176 (TF)+
Antigeenexpressie
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-MHC klasse I+, MHC klasse II (HLA-DR)+
Virussen
Transformant: EBV

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% hitte-geïnactiveerde FBS
Heruitplanten
Onderhoud de culturen door periodiek medium toe te voegen of te vervangen. Start de culturen met een dichtheid van 2 x 105 cellen/ml en houd de celconcentratie binnen het bereik van 1 x 105 tot 5 x 105 cellen/ml voor een optimale groei.
Vloeistofverversing
Zodra de medium kleur geel werd
Herstel na ontdooiing
Medium
Ontdooien en kweken

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
Kind
Etnische afkomst
Kaukasisch