LN-18

A LN-18 é uma linhagem celular de glioma maligno humano, originalmente derivada de um tumor do lobo temporal de um paciente adulto do sexo masculino diagnosticado com glioblastoma multiforme (grau IV de Kernohan). A linhagem foi estabelecida in vitro e tem sido mantida por mais de 115 passagens em cultura de monocamada. As células LN-18 apresentam morfologias bipolares ou estreladas com núcleos pleomórficos e têm um tempo de duplicação de aproximadamente 72 horas. Embora as primeiras culturas e o material de biópsia expressassem a proteína ácida fibrilar glial (GFAP), a síntese de GFAP não foi observada em passagens posteriores. No entanto, a origem glial das células foi confirmada por meio de análise ultraestrutural. As células LN-18 também apresentaram a presença de antígenos do tipo Ia em sua superfície e foram capazes de sintetizar altos níveis de fibronectina, ambas características relevantes para a patologia do glioma e para as interações tumor-hospedeiro.

Em termos de tumorigenicidade, as células LN-18 são capazes de formar tumores sólidos quando injetadas em camundongos nude, sendo os tumores resultantes transplantáveis e histologicamente semelhantes ao glioblastoma original. A análise cariotípica revelou a presença de três cromossomos marcadores consistentes, fornecendo uma impressão digital citogenética para a linhagem celular. Apesar da ausência detectável das proteínas GFAP ou S-100 em passagens posteriores, a linhagem LN-18 continua sendo um modelo valioso para o estudo da biologia do glioma humano, especialmente no que se refere à expressão de antígenos de superfície celular, tumorigênese e interações com a matriz extracelular por meio da produção de fibronectina. A linhagem celular também possui características de crescimento estáveis e é passível de criopreservação, tornando-a adequada para uso experimental de longo prazo.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.