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HCT-8 (HRT-18)-Zellen
Gewebe
Rektum
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
HCT 8, HCT8

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HCT-8 (HRT-18)-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300210

HCT-8-Zellen, auch bekannt als menschliche ileozökale kolorektale Adenokarzinomzellen, sind eine Epithelzelllinie, die ursprünglich von einem 67-jährigen kaukasischen Mann gewonnen wurde...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HCT-8-Zellen, auch bekannt als humane ileozökale kolorektale Adenokarzinomzellen, sind eine epitheliale Zelllinie, die ursprünglich von einem 67-jährigen kaukasischen Patienten mit ileozökalem Adenokarzinom stammt. Die HCT-8-Zelllinie wurde in den späten 1960er Jahren etabliert und wird in der Krebsforschung häufig verwendet, insbesondere zur Untersuchung der Pathogenese, Metastasierung und des Ansprechens auf die Behandlung von Darmkrebs.

Morphologisch gesehen sind HCT-8-Zellen epithelähnlich und weisen ein monolayerisches Wachstumsmuster mit einer polygonalen Form auf. Sie sind in der Lage, sowohl in adhärenten als auch in semi-suspendierten Kulturen zu wachsen, was für einige Übergangsstadien der Metastasierung von Krebszellen charakteristisch ist. Diese Eigenschaft macht sie besonders nützlich für Studien im Zusammenhang mit der Invasion und Migration von Krebszellen.

Genotypisch sind HCT-8-Zellen hypertriploid und weisen mehrere Chromosomenaberrationen auf, die bei kolorektalen Karzinomen häufig vorkommen, darunter Mutationen und Deletionen, die für das Fortschreiten des Krebses und die Resistenzmechanismen relevant sind. Dieses genetische Profil begünstigt ihre Verwendung in onkologischen Studien, insbesondere in solchen, die sich auf genetische Signalwege konzentrieren, die an der Tumorentstehung und Arzneimittelresistenz beteiligt sind.

Die Forschung mit HCT-8-Zellen hat wesentlich zum Verständnis der Biologie des Darmkrebses beigetragen, einschließlich der Aufklärung von molekularen Signalwegen, die an der Vermehrung von Krebszellen, der Apoptose und der Chemoresistenz beteiligt sind. Die Zelllinie ist nach wie vor ein wichtiges Modell für die Untersuchung der Wirksamkeit neuer therapeutischer Wirkstoffe und für die Erforschung der molekularen Mechanismen, die dem Darmkrebs zugrunde liegen.

Gewebe
Rektum
Krankheit
Adenokarzinom
Synonyme
  • HCT 8
  • HCT8

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
In Nacktmäusen
Verdopplungszeit
15 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HCT-8 (Cytion-Katalognummer 300210)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_2478

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
CDx (+/-), CDy (-),
Isoenzyme
AK-1, 1, ES-D, 1-2, GLO-1, 2, G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, Me-2, 1
Mutationsprofil
HRT-18-Zellen tragen eine Mutation in Codon 13 des Kras-Gens: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Viren
Reverse Transkriptase negativ
Produkte
Carcinoembryonales Antigen (CEA) 0,5 ng/10 exp6 Zellen/10 Tage, alkalische Phosphatase, Keratin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
2 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Schnell
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
67 Jahre