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Cellule HCT-8 (HRT-18)
Tessuto
Retto
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
HCT 8, HCT8

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Cellule HCT-8 (HRT-18)

Cell line · Codice prodotto 300210

Le cellule HCT-8, note anche come cellule di adenocarcinoma colorettale ileocecale umano, sono una linea cellulare epiteliale originariamente derivata da un uomo caucasico di 67 anni...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule HCT-8, note anche come cellule di adenocarcinoma colorettale ileocecale umano, sono una linea cellulare epiteliale originariamente derivata da un paziente maschio caucasico di 67 anni affetto da adenocarcinoma ileocecale. La linea cellulare HCT-8 è stata creata alla fine degli anni '60 ed è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro, in particolare nello studio della patogenesi del cancro colorettale, delle metastasi e della risposta ai trattamenti.

Morfologicamente, le cellule HCT-8 sono di tipo epiteliale e presentano un modello di crescita monostratificato di forma poligonale. Possiedono la capacità di crescere sia in coltura aderente che in coltura semisospesa, caratteristica di alcuni stadi transitori della metastasi delle cellule tumorali. Questa caratteristica le rende particolarmente utili per gli studi relativi all'invasione e alla migrazione delle cellule tumorali.

Dal punto di vista genotipico, le cellule HCT-8 sono ipertriploidi e contengono diverse aberrazioni cromosomiche comuni nei carcinomi colorettali, tra cui mutazioni e delezioni rilevanti per la progressione del cancro e i meccanismi di resistenza. Questo profilo genetico ne favorisce l'impiego negli studi oncologici, in particolare quelli incentrati sulle vie genetiche coinvolte nella tumorigenesi e nella resistenza ai farmaci.

La ricerca che utilizza le cellule HCT-8 ha contribuito in modo significativo alla comprensione della biologia del cancro colorettale, compresa l'elucidazione delle vie molecolari coinvolte nella proliferazione delle cellule tumorali, nell'apoptosi e nella chemioresistenza. Questa linea cellulare continua a essere un modello critico per studiare l'efficacia di nuovi agenti terapeutici e per esplorare i meccanismi molecolari alla base del cancro del colon-retto.

Tessuto
Retto
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
  • HCT 8
  • HCT8

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
In topi nudi
Tempo di raddoppio
15 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HCT-8 (numero di catalogo Cytion 300210)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2478

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
CDx (+/-), CDy (-),
Isoenzimi
AK-1, 1, ES-D, 1-2, GLO-1, 2, G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, Me-2, 1
Profilo mutazionale
Le cellule HRT-18 portano una mutazione nel codone 13 del gene Kras: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Virus
Trascrittasi inversa negativa
Prodotti
Antigene carcinoembrionale (CEA) 0,5 ng/10 cellule exp6/10 giorni, fosfatasi alcalina, cheratina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 2 a 4 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Veloce
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
67 anni