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Células HCT-8 (HRT-18)
Tecido
Rectum
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
HCT 8, HCT8

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Células HCT-8 (HRT-18)

Cell line · Número do produto 300210

As células HCT-8, também conhecidas como células de adenocarcinoma colorretal ileocecal humano, são uma linha celular epitelial originalmente derivada de um homem caucasiano de 67 anos...

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01Informações gerais

Descrição

As células HCT-8, também conhecidas como células de adenocarcinoma colorrectal ileocecal humano, são uma linha de células epiteliais originalmente derivada de um doente caucasiano de 67 anos com adenocarcinoma ileocecal. A linha de células HCT-8 foi criada no final da década de 1960 e é amplamente utilizada na investigação do cancro, em especial no estudo da patogénese do cancro colorrectal, das metástases e da resposta ao tratamento.

Morfologicamente, as células HCT-8 são do tipo epitelial e exibem um padrão de crescimento em monocamada com uma forma poligonal. Possuem a capacidade de crescer tanto em culturas aderentes como semi-suspensas, o que é caraterístico de algumas fases transitórias de metástases de células cancerígenas. Esta caraterística torna-as particularmente úteis para estudos relacionados com a invasão e migração de células cancerosas.

Genotipicamente, as células HCT-8 são hipertriplóides, contendo várias aberrações cromossómicas comuns nos carcinomas colorrectais, incluindo mutações e deleções que são relevantes para a progressão do cancro e para os mecanismos de resistência. Este perfil genético apoia a sua utilização em estudos oncológicos, especialmente os que se centram nas vias genéticas envolvidas na tumorigénese e na resistência aos medicamentos.

A investigação que utiliza células HCT-8 contribuiu significativamente para a compreensão da biologia do cancro colorrectal, incluindo a elucidação das vias moleculares envolvidas na proliferação das células cancerosas, na apoptose e na quimiorresistência. Esta linha celular continua a ser um modelo fundamental para a investigação da eficácia de novos agentes terapêuticos e para a exploração dos mecanismos moleculares subjacentes ao cancro colorrectal.

Tecido
Rectum
Doença
Adenocarcinoma
Sinónimos
  • HCT 8
  • HCT8

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Em ratinhos nus
Tempo de duplicação
15 horas

04Identificadores

Referência
HCT-8 (número de catálogo Cytion 300210)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2478

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
CDx (+/-), CDy (-),
Isoenzimas
AK-1, 1, ES-D, 1-2, GLO-1, 2, G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, Me-2, 1
Perfil mutacional
As células HRT-18 são portadoras de uma mutação no códão 13 do gene Kras: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Vírus
Transcriptase reversa negativa
Produtos
Antigénio carcinoembrionário (CEA) 0,5 ng/10 células exp6/10 dias, fosfatase alcalina, queratina

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
2 a 4 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Rápido
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
67 anos