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LLC-PK1
Gewebe
Niere
Synonyme
LLC-PK(1), LLC-PK-1, LLC PK-1, LLc-PK1, LLC PK1, LLCPK1, Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1

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LLC-PK1

Cell line · Artikelnummer 607264

LLC-PK1 cells are a well-established and widely used cell line in biomedical research. These cells were derived from a healthy male pig's kidney, exhi...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

LLC-PK1-Zellen sind eine gut etablierte und weit verbreitete Zelllinie in der biomedizinischen Forschung. Diese Zellen wurden aus der Niere eines gesunden männlichen Schweins gewonnen und weisen eine typische epitheliale Morphologie auf. Die LLC-PK1-Linie ist polarisiert und enthält enge Verbindungsstellen, was sie zu einem idealen Modell für Epithelgewebe macht.

Eine der entscheidenden Eigenschaften der LLC-PK1-Zellen ist ihre Fähigkeit, Plasminogenaktivator zu produzieren, eine Substanz, die die Fibrinolyse stimuliert. Diese Eigenschaft hat LLC-PK1-Zellen für die Thromboseforschung besonders wertvoll gemacht.

In den letzten Jahren wurde der Plasminogenaktivator in Medikamenten für die Thrombosetherapie eingesetzt, da er die Auflösung kleiner Blutgerinnsel erleichtert. LLC-PK1-Zellen produzieren nicht nur Plasminogenaktivatoren, sondern auch große Mengen an Cytokeratin. Diese Eigenschaft hat sie für verschiedene pharmakologische und metabolische Forschungsuntersuchungen beliebt gemacht.

Die LLC-PK1-Linie wurde in Studien zu Stoffwechsel, Transport, Toxizität und Interaktion von Medikamenten eingesetzt. LLC-PK1-Zellen werden auch häufig für Permeabilitätstests verwendet. Der Mechanismus des Uracil-Transports unterscheidet sich je nach Zelllinie, mit einem Na+-unabhängigen System an der basolateralen Membran in Caco-2-Zellen und sowohl Na+-abhängigen als auch Na+-unabhängigen Systemen an der apikalen Membran in LLC-PK1-Zellen.

Im Vergleich zu anderen Zelllinien weisen LLC-PK1-Zellen viele Merkmale von proximalen Tubuluszellen in vivo auf, darunter Mikrovilli an der apikalen Membran, hohe Aktivitäten von Enzymen an der apikalen Membran und die Expression von Parathormonrezeptoren und natriumabhängigen Glukosetransportern. Dies macht LLC-PK1-Zellen zu einem wertvollen Hilfsmittel in Studien zur Nierentoxikologie. Eine weitere Zelllinie, die häufig in Studien zur Nierentoxikologie verwendet wird, ist die MDCK-Zelllinie. Wie LLC-PK1-Zellen sind MDCK-Zellen epithelial, weisen jedoch Merkmale auf, die eher für distale Tubuluszellen typisch sind.

Sie exprimieren Vasopressin-, Oxytocin- und Prostaglandinrezeptoren, die, wenn sie stimuliert werden, die Adenylatzyklase aktivieren. LLC-PK1- und MDCK-Zelllinien vermehren sich schnell und können problemlos über viele Generationen in Monolayer-Kulturen weitergegeben werden. LLC-PK1-Zellen sind auch in der Lage, "Kuppeln" zu bilden, d. h. mit Flüssigkeit gefüllte Blasen, die durch den Transport von Wasser und gelösten Stoffen, durch enge Verbindungsstellen und durch die Adhäsion der Zellen am Substrat entstehen.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die LLC-PK1-Zelllinie ein vielseitiges und wertvolles Instrument für die biomedizinische Forschung ist. Sie wurde in verschiedenen Studien zum Arzneimittelstoffwechsel, zum Arzneimitteltransport, zur Arzneimitteltoxizität, zu Wechselwirkungen zwischen Arzneimitteln, zur Nierentoxikologie und zu Permeabilitätstests eingesetzt. Mit ihrer gut etablierten epithelialen Morphologie und der Produktion von Plasminogenaktivator und Cytokeratin sind LLC-PK1-Zellen ein ideales Modell für Epithelgewebe.

Gewebe
Niere
Anwendungen
Arzneimittelmetabolismus, Permeabilitätstests, Toxizität und Interaktionsstudien.
Synonyme
  • LLC-PK(1)
  • LLC-PK-1
  • LLC PK-1
  • LLc-PK1
  • LLC PK1
  • LLCPK1
  • Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1

02Klassifizierung

Organismus
Schwein
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich

04Bezeichner

Quellenangabe
LLC-PK1 (Cytion-Katalognummer 607264)
NCBI-Steuer-ID
9823
Cellosaurus
CVCL_0391

05Expression und Anfälligkeit

Viren
Enthält Sequenzen und Transkripte des Porcinen Onkovirus Typ C (PCOV). Virus-Expression kann nicht ausgeschlossen werden.
Produkte
Plasminogen-Aktivator

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Medium 199, w: 2,7 mM stabiles Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820101a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 3% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Die Suspensionszellen in einem 15-ml-Röhrchen sammeln und die anhaftenden Zellen vorsichtig mit PBS ohne Kalzium und Magnesium waschen (3-5 ml für T25-Kolben und 5-10 ml für T75-Kolben verwenden). Accutase auftragen (1-2 ml für T25-Kolben, 2,5 ml für T75-Kolben), um sicherzustellen, dass die Zellschicht vollständig bedeckt ist. Die Zellen 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren lassen. Nach der Inkubation sowohl die Suspension als auch die adhärenten Zellen mischen und zentrifugieren. Nach der Zentrifugation das Zellpellet vorsichtig resuspendieren und die Zellsuspension in neue Flaschen mit frischem Medium überführen.
Aussaatdichte
1 bis 3 x 106 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
Alle 3 Tage
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
Hampshire
Alter des Spenders
3-4 Wochen