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WI 38 VA13 subline 2RA
Gewebe
Lunge
Synonyme
WI 38 VA-13 subline 2RA, WI 38VA13 subline 2RA, WI-38 VA13 sub 2 RA, WI38-VA13 subline 2RA, WI38 VA13/2RA, WI38VA13/2RA, VA13 2RA, WI-38 VA13, WI 38 VA 13, WI38-VA13, WI38/VA13, WI38VA13, VA-13, VA13, AG07217, AG7217

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WI 38 VA13 subline 2RA

Cell line · Artikelnummer 300421

The WI-38 VA13 subline 2RA, derived from the historic WI-38 cell line originally sourced from the lung tissue of a 3-month-old fetus, represents a key adv...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die WI-38 VA13-Sublinie 2RA, die von der historischen WI-38-Zelllinie abgeleitet ist, die ursprünglich aus dem Lungengewebe eines 3 Monate alten Fötus gewonnen wurde, stellt einen entscheidenden Fortschritt in der Zellkulturtechnologie dar. Die ursprüngliche WI-38-Zelllinie war für die Entwicklung von Impfstoffen gegen zahlreiche Viruserkrankungen wie Masern, Mumps, Röteln und Hepatitis A von entscheidender Bedeutung. Die VA13-Sublinie 2RA ist eine immortalisierte Variante dieser Zelllinie, die durch die Transformation mit dem Simian-Virus 40 (SV40) erreicht wurde, einer bei der Entwicklung unsterblicher Zelllinien üblichen Praxis, die eine unbegrenzte Zellvermehrung über den Standard-Seneszenzpunkt von etwa 50 Populationsverdopplungen hinaus ermöglicht.

Durch den Einbau von SV40 in die WI-38-Zellen zur Schaffung der VA13-Sublinie 2RA wird die Lebensdauer der Zellen verlängert und ein haltbareres Modell für Langzeitexperimente geschaffen. Diese Transformation behält die grundlegenden Eigenschaften der ursprünglichen diploiden Zellen bei, verändert aber ihren Lebenszyklus und ihre Wachstumsmuster, was ein anhaltendes Wachstum ermöglicht und umfangreiche Studien erleichtert, die mit der begrenzten Lebensdauer der Stammzelllinie nicht möglich waren. Dies macht die VA13-Sublinie besonders nützlich für laufende und umfangreiche Forschungsbereiche wie Virologie, Pharmakologie und Genforschung, in denen längere Beobachtungszeiträume erforderlich sind.

Gewebe
Lunge
Synonyme
  • WI 38 VA-13 subline 2RA
  • WI 38VA13 subline 2RA
  • WI-38 VA13 sub 2 RA
  • WI38-VA13 subline 2RA
  • WI38 VA13/2RA
  • WI38VA13/2RA
  • VA13 2RA
  • WI-38 VA13
  • WI 38 VA 13
  • WI38-VA13
  • WI38/VA13
  • WI38VA13
  • VA-13
  • VA13
  • AG07217
  • AG7217

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
2

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Fibroblasten
Karyotyp
Hyperdiploid, Modalzahl: 73-78

04Bezeichner

Quellenangabe
WI 38 VA13 Sublinie 2RA (Cytion Katalognummer 300421)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_2759

05Expression und Anfälligkeit

Isoenzyme
G6PD, B
Viren
Enthält Papovavirus
Anfälligkeit für Viren
Herpes simplex, vesikuläre Stomatitis (Indiana), Poliovirus 2
Reverse Transkriptase
Negativ

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
1 bis 2 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 48 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und anhaften lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
3 Monate Trächtigkeit
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch

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